[发明专利]一种聚乙二醇偶联结合超滤离心分离富集糖肽的方法有效
| 申请号： | 201110104461.X | 申请日： | 2011-04-25 |
| 公开（公告）号： | CN102757992A | 公开（公告）日： | 2012-10-31 |
| 发明（设计）人： | 张丽华;侯春彦;杨开广;梁振;张玉奎 | 申请（专利权）人： | 中国科学院大连化学物理研究所 |
| 主分类号： | C12P21/00 | 分类号： | C12P21/00;C07K14/00;C07K9/00;C07K1/34 |
| 代理公司： | 沈阳科苑专利商标代理有限公司 21002 | 代理人： | 马驰 |
| 地址： | 116023 *** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | 本发明涉及糖肽的富集方法，具体地说是一种聚乙二醇偶联结合超滤分离富集糖肽的方法；N-连接糖蛋白质经过酶解产生的肽段混合物中加入高碘酸，糖链上的顺式邻二醇经氧化生成醛基，通过反相色谱除盐去除多余的高碘酸；向氧化后的肽段混合物中加入单甲氧基聚乙二醇酰肼（mPEG-Hz），在乙酸－乙酸钠缓冲液中糖肽与聚乙二醇偶联；将反应产物加入超滤离心管样品池中，经过清洗和离心过滤将糖肽和非糖肽分开；糖肽保留在滤膜内，非糖肽离心到滤膜外；向样品池中再加入肽N-糖苷酶F（PNGaseF）的碳酸氢铵缓冲液，酶解后将肽段从其糖基化位点处酶切下来，经过离心即可获得含糖基化位点的肽段。本发明的优点为：是一种普适性的糖肽富集方法，具有较好的选择性，操作步骤简单，非特性吸附的清洗比较容易，成本较低。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 聚乙二醇 联结 超滤 离心 分离 富集 糖肽 方法 | ||
【主权项】：
一种聚乙二醇偶联结合超滤离心分离富集糖肽的方法，其特征在于：1）N‑连接糖蛋白质经过酶解产生的肽段混合物中加入高碘酸，糖链上的顺式邻二醇经氧化生成醛基，通过反相色谱除盐去除多余高碘酸；2）向氧化后的肽段混合物中加入单甲氧基聚乙二醇酰肼（mPEG‑Hz），在乙酸‑乙酸钠缓冲液中糖肽与聚乙二醇偶联；3）将反应产物加入超滤离心管样品池中，经过清洗和离心过滤将糖肽和非糖肽分开；糖肽保留在滤膜内，非糖肽离心到滤膜外；4）向样品池中再加入肽N‑糖苷酶F（PNGase F）的碳酸氢铵缓冲液，酶解后将肽段从其糖基化位点处酶切下来，经过离心即可获得含糖基化位点的肽段。
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