[发明专利]利用慢病毒载体介导RNAi的方法有效
| 申请号： | 201110110644.2 | 申请日： | 2011-04-29 |
| 公开（公告）号： | CN102206645A | 公开（公告）日： | 2011-10-05 |
| 发明（设计）人： | 胡康洪;王薇薇;彭洪泉 | 申请（专利权）人： | 中国科学院武汉病毒研究所 |
| 主分类号： | C12N15/113 | 分类号： | C12N15/113;C12N15/867;C12Q1/70;C12Q1/68;G01N33/569 |
| 代理公司： | 湖北武汉永嘉专利代理有限公司 42102 | 代理人： | 王守仁 |
| 地址： | 430071 湖北*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明是一种利用慢病毒载体介导RNAi的方法，具体是：先对相关病毒的核酸序列进行同源性分析，找出保守区域，设计出针对相关病毒保守区域的siRNA；将siRNA克隆到表达质粒pLVTH后，再与pCMV-dR8.91、pMD2.G共同转染293T细胞中，收集转染后细胞上清，经超速离心、纯化、浓缩后形成了表达siRNA的高滴度的慢病毒载体，然后将其与LV-tTR-KRAB共转导入靶细胞，并且利用四环素类似物DOX来严格控制siRNA药物作用的时间及剂量。本发明因其高效的转导率及严格的控制体系可以真实的评价siRNA在体内的抗病毒作用，同时可以追踪药物干扰作用的全过程，从而为临床提供了使用前景。 | ||
| 搜索关键词： | 利用 病毒 载体 rnai 方法 | ||
【主权项】：
一种利用慢病毒载体介导RNAi的方法，其特征是一种基于强力霉素控制的慢病毒载体介导RNAi的方法，具体是：首先，运用相关的生物学软件对相关病毒的核酸序列进行同源性分析，找出保守区域，设计出针对相关病毒保守区域的siRNA；再将合成的siRNA克隆到表达质粒pLVTH中，然后将该表达质粒与pCMV‑dR8.91、pMD2.G共同转染293T细胞中，收集转染后细胞上清，经超速离心、纯化、浓缩后形成了表达siRNA的高滴度的慢病毒载体，最后将表达siRNA的慢病毒载体与控制四环素开关的慢病毒载体LV‑tTR‑KRAB共转导入靶细胞，并且利用四环素类似物DOX来严格控制siRNA药物作用的时间及剂量。
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