[发明专利]一种通过DNA定量测定蓝藻胞内藻毒素含量的方法

摘要

本发明属于环境微生物领域，具体涉及一种通过DNA定量测定蓝藻胞内藻毒素含量的方法。该方法针对产毒蓝藻，通过检测其藻细胞中的DNA含量，并根据DNA含量与胞内藻毒素产量之间的相关性关系进行计算，以实现藻毒素的定量。本发明提供的方法简单、便捷和经济，可操作性与重复性强，可同时获得蓝藻细胞DNA含量与藻毒素含量。

主权项

一种通过DNA定量测定蓝藻胞内藻毒素含量的方法，其特征是：通过检测蓝藻细胞中的DNA含量，并根据蓝藻中DNA含量与其胞内藻毒素产量之间的相关性关系进行计算，以实现蓝藻藻毒素的定量，该方法的步骤包括：(1)利用E.Z.N.A.TM Bacterial DNA Kit试剂盒提取蓝藻细胞中总DNA，最终提取液50μl，提取后，用NanoDrop ND‑100分光光度计在260nm波长下检测DNA浓度；(2)蓝藻胞内藻毒素用SiliaPrep C18SPE小柱进行提取：首先样品经过用10ml甲醇和20ml水预先活化的小柱进行富集，然后用20ml水及20ml 10％和20％的甲醇分别进行洗涤，再用10ml甲醇将藻毒素进行洗脱；(3)溶出的MC‑甲醇溶液通过旋转蒸发仪蒸发至微量，甲醇定容至1ml，将定容后的样品用0.22μm的水系玻璃纤维滤膜过滤，滤液装入液相瓶，采用HPLC法实现藻毒素产量的测定；藻毒素检测的色谱条件为：色谱柱温度：30℃，流动相：甲醇∶水(含0.1％TFA)＝80∶20，流速：1ml/min，检测器：紫外可见光检测器波长238nm；(4)建立蓝藻细胞中的DNA含量与其胞内藻毒素含量之间的线性关系，并计算线性方程，根据该线性方程实现通过DNA定量获得蓝藻胞内藻毒素含量测定。