[发明专利]一种检测秦川牛AMPD1基因连锁突变的方法

摘要

本发明公开了一种检测秦川牛AMPD1基因连锁突变的PCR-SSCP方法，该方法是以包含AMPD1基因的待测秦川牛全基因组DNA序列为模板，在2×Reaction Mix、ddH2O、Forward primer、Reverse primer、Golden DNApolymerase、DNA模板存在的情况下，设计聚合酶链式反应引物，在PCR反应程序下进行扩增，扩增后对PCR产物进行变性，然后再进行聚丙烯酰胺凝胶电泳，利用凝胶成像系统分析其片段，从而确定其单核苷酸多态性。该检测方法操作简单、快速、成本低，而且检测的精确度高，便于推广应用。

主权项

一种检测秦川牛AMPD1基因连锁突变的PCR‑SSCP方法，其特征在于，以包含AMPD1基因的待测秦川牛全基因组DNA序列为模板，在2×Reaction Mix、ddH2O、Forward primer、Reverse primer、Golden DNA polymerase、DNA模板存在的情况下，设计聚合酶链式反应引物，在PCR反应程序下进行扩增，扩增后对PCR产物进行变性，然后再对变性后的扩增片段进行聚丙烯酰胺凝胶电泳，利用凝胶成像系统分析，并鉴定其多态片段，得秦川牛AMPD1基因第11内含子区域第19416位和第19421位分别发生了T＞C和A＞G的单核苷酸多态性；所述的聚合酶链式反应引物为：上游引物：5′‑AACCCTCAGGCTCACCCA‑3′18bp；下游引物：5′‑GGGCTTAGGGCTCTTGGA‑3′18bp。