[发明专利]一种HIV重组亚型DNA疫苗的制备方法无效
| 申请号： | 201110127617.6 | 申请日： | 2011-05-17 |
| 公开（公告）号： | CN102210874A | 公开（公告）日： | 2011-10-12 |
| 发明（设计）人： | 杨益大;郑临;吕国才;谢珏;卢微;杨萍;王晓燕 | 申请（专利权）人： | 浙江大学 |
| 主分类号： | A61K48/00 | 分类号： | A61K48/00;A61K39/21;C12N15/49;A61P31/18 |
| 代理公司： | 杭州求是专利事务所有限公司 33200 | 代理人： | 张法高;赵杭丽 |
| 地址： | 310027 浙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明提供一种HIV重组亚型DNA疫苗的制备方法，通过以下步骤实现：设计与合成密码子优化后的融合基因序列，DNA疫苗的构建和体外表达能力测定。本发明以AE重组亚型HIV-1病毒为研究对象，构建包括env、pol、gag、tat、nef和rev基因在内的DNA疫苗，与AE-TRIVN相比，AE-Gp145TRN能够使特异性T细胞反应在Tat、Rev、Nef三个蛋白间更均匀的分布，提高了疫苗所活化的免疫反应广度。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 hiv 重组 dna 疫苗 制备 方法 | ||
【主权项】：
一种HIV重组亚型DNA疫苗的制备方法，其特征在于，通过以下步骤实现：(1) 设计与合成密码子优化后的融合基因序列，(2) DNA疫苗的构建和体外表达能力测定，A：重组质粒的酶切鉴定与测序：将构建的重组质粒AE‑Gp145TRN用BamHI和XbaI进行双酶切，酶切产物进行l%琼脂糖凝胶电泳，其中，Gp145TRN融合基因的片段长度为3423bp，载体片段长度为5071 bp，电泳结果显示：酶切结果与预期结果完全一致，DNA双向序列测定结果显示：插入序列与设计的序列完全一致；B：TRIVN融合蛋白真核表达：用LipofectamineTM 2000将空载体质粒与重组质粒AE‑Gp145TRN分别转染293T细胞，培养48 h后收集细胞，并制备蛋白样品进行Western‑Blot验证，在各泳道上样量基本相当的情况下，Western‑Blot结果显示，重组质粒转染产物中出现约190KDa的特异性条带，与预期大小一致。
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