[发明专利]一种产硫酸软骨素菌株的筛选方法及用该菌株发酵法生产硫酸软骨素

摘要

本发明阐述了一种产硫酸软骨素枯草芽孢杆菌的筛选方法和用该菌株发酵法生产硫酸软骨素，属于生物工程技术领域。本发明菌株是将豆豉经过沸水浴后稀释涂布，染色镜检得到的有芽孢菌株，然后对筛选出的菌株采用一级发酵逐一摇瓶培养，发酵液中加入鲨鱼硫酸软骨素标准品作为内标，采用高效液相色谱法进行定性分析筛选，并对筛选菌株进行形态学、生理生化及分子生物学鉴定。得到一株产硫酸软骨素的枯草芽孢杆菌。本发明同时公开一种采用该菌株生产硫酸软骨素的方法，采用本方法发酵24h硫酸软骨素产量为177mg/L。

主权项

一种产硫酸软骨素枯草芽孢杆菌的筛选方法，其特征为：1)枯草芽孢杆菌的初步分离纯化称取约0.2g豆豉于20ml 0.85％无菌生理盐水中，将菌悬液在沸水中振荡加热10min后，迅速冷却至室温，稀释菌悬液涂布于LB平板上，37℃倒置培养24h，挑取不同菌落形态的单菌落进行结晶紫染色，显微镜下观察芽孢，将有芽孢菌株作为进一步筛选的枯草芽孢杆菌疑似菌株，编号保存；2)产硫酸软骨素枯草芽孢杆菌的筛选将上述分离纯化得到的菌种接种于营养肉汤培养基中，培养24h后离心收集发酵液，发酵液采用内标法经高效液相色谱进行定性分析，使得硫酸软骨素标准品峰高增高的菌株即为产硫酸软骨素的枯草芽孢杆菌。