[发明专利]一种细菌中耐药基因新德里β-内酰胺酶的快速检测方法

摘要

本发明公开了一种细菌中耐药基因新德里β-内酰胺酶的快速检测方法，步骤是：A、裂解或提取测试菌中的DNA用于PCR反应的模板；B、设计PCR引物，扩增全长的新德里β-内酰胺酶基因；C、浓缩扩增的blaNDM-1基因片段并定量；D、采用小麦胚芽无细胞表达系统表达blaNDM-1酶；E、测定表达的新德里β-内酰胺酶（NDM-1）降解抗生素的活性。在于使用一对PCR引物和测定降解抗生素的活性来达到检测和表征细菌中耐药基因新德里β-内酰胺酶。同时公开了扩增全长blaNDM-1基因又适合小麦胚芽无细胞表达系统表达NDM-1的引物序列。方法易行，本发明能快速检测，灵敏度高，操作简便，使用一对PCR引物和测定降解抗生素的活性来达到检测和表征细菌中耐药基因新德里β-内酰胺酶。

主权项

一种细菌中耐药基因新德里β‑内酰胺酶的快速检测方法，其步骤是：A、裂解或提取测试菌中的DNA用于PCR反应的模板；裂解菌的方法包括加热煮沸法、超声破碎法、压力法，将菌壁破碎，释放菌基因组；以直接裂解液作为模板，或进一步提取DNA后，再作为模板；B、设计PCR引物，扩增全长的新德里β‑内酰胺酶基因；在于PCR引物序列根据新德里β‑内酰胺酶基因的末端上下游序列来设计，同时在于PCR引物序列上同时带有适合小麦胚芽无细胞表达系统的启动子，或者同时带有启动子和表达增强子；C、浓缩扩增的blaNDM‑1基因片段并定量；浓缩方法包括乙醇沉淀法、吸附提取法；定量方法包括紫外吸收法、荧光定量法，在于控制用于表达新德里β‑内酰胺酶的基因模板量；D、采用小麦胚芽无细胞表达系统表达新德里β‑内酰胺酶；表达时间调节1‑24小时；E、测定表达的新德里β‑内酰胺酶降解抗生素的活性，或新德里β‑内酰胺酶抑制剂，混合后测定降解抗生素的活性，在于通过活性测定来确证样品菌中含有blaNDM‑1基因和表征其编码的酶的性质。