[发明专利]一种能感染茶尺蠖的重组核型多角体病毒的制备方法无效
| 申请号： | 201110150865.2 | 申请日： | 2011-06-07 |
| 公开（公告）号： | CN102260690A | 公开（公告）日： | 2011-11-30 |
| 发明（设计）人： | 杨益民;贡成良;潘中华;曹广力;薛仁宇;刘卫星;郭睿 | 申请（专利权）人： | 溧阳市民生农业科技园有限公司;苏州大学 |
| 主分类号： | C12N15/34 | 分类号： | C12N15/34;C12N15/63;C12N15/66;C12N7/01;A01N63/00;A01P7/04 |
| 代理公司： | 苏州创元专利商标事务所有限公司 32103 | 代理人： | 陶海锋 |
| 地址： | 213300 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种能感染茶尺蠖的重组核型多角体病毒的制备方法，包括以下步骤：(1)制备重组载体pFastBacDual-polh-helicase；(2)将重组载体pFastBacDual-polh-helicase转化进E.coliDH10BmBacmid感受态细胞内，在培养板上培养，然后通过蓝白斑筛选获得阳性菌斑，从阳性菌斑中提取重组BmBacmid-polh-helicaseDNA；(3)将上述重组BmBacmid-polh-helicaseDNA转染到家蚕培养细胞，收集培养细胞上清，获得重组病毒BmEoNPV；(4)每将重组病毒注射，纯化得到重组病毒多角体。将上述重组核型多角体病毒喷洒在茶叶树叶面上，可防止茶尺蠖对茶叶树的危害，而且该方法成本低、生产易控。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 感染 尺蠖 重组 核型 多角体 病毒 制备 方法 | ||
【主权项】：
一种能感染茶尺蠖的重组核型多角体病毒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1) 制备包含茶尺蠖核型多角体病毒的包膜蛋白odv‑e25、odv‑e28和解螺旋酶基因的片段，带启动子的家蚕核型多角体病毒基因polh的重组载体，得到重组载体pFastBacDual‑polh‑helicase；(2) 将重组载体pFastBacDual‑polh‑helicase转化进E. coli DH10 BmBacmid 感受态细胞内，在培养板上培养，然后通过蓝白斑筛选获得阳性菌斑，从阳性菌斑中提取重组BmBacmid‑polh‑helicaseDNA；(3) 将上述重组BmBacmid‑polh‑helicase DNA转染到家蚕培养细胞，培养4～6天，收集培养细胞上清，获得P1代重组病毒BmEoNPV；采用P1代重组病毒BmEoNPV感染家蚕培养细胞，培养4～6天，收集培养细胞上清，获得P2代重组病毒BmEoNPV；(4) 每头5龄家蚕注射1～2微升P2代重组病毒BmEoNPV，发病后，纯化重组病毒多角体，即得所述能感染茶尺蠖的重组核型多角体病毒。
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