[发明专利]一种利用适配子技术检测鉴别蛇毒种类的方法

摘要

本发明公开了一种利用适配子技术检测鉴别蛇毒种类的方法属生物医学检验领域，涉及一种利用适配子技术检测蛇毒的方法。本发明针对蛇毒成分复杂，目前蛇伤检测方法特异性与敏感性差等问题，采用消减适配子筛选技术（depletionSELEX），筛选获得具有高度蛇毒种属特异性的适配子，并将适配子转为报告适配子建立蛇毒快速检测新方法。

主权项

一种利用适配子技术检测鉴别蛇毒种类的方法，其特征在于按如下步骤进行：（1）先构建随机单链DNA文库和引物，单链DNA文库通过PCR扩增为双链DNA、再通过非对称PCR扩增并纯化得到单链DNA文库；（2）筛选出纯化的单链DNA文库与靶标粗蛇毒相结合的单链DNA；再次常规PCR和非对称PCR扩增DNA、纯化得到与靶标粗蛇毒相结合的单链DNA；（3）将步骤（2）得到的单链DNA再与需要鉴别的4~8种蛇毒反筛得到不相结合的单链DNA；（4）按照步骤（2）和步骤（3）交叉循环筛选，得到可与蛇毒蛋白高亲和性结合同时不与鉴别蛇毒结合的单链DNA适配子，PCR扩增为双链DNA、非对称PCR扩增并纯化得到单链DNA适配子库；（5）对筛选终池单链DNA适配子库进行亲和性检测筛选出靶标适配子；（6）获得的适配子进行修饰增强其稳定性，然后用荧光素、生物素、放射性同位素或胶体金进行标记转为报告适配子；（7）采用酶联免疫法从蛇伤受害者血、尿、伤口组织及分泌物中检测相应的蛇毒物质，从而判断蛇伤种类，进行相应的抗蛇毒血清救治。