[发明专利]一种快速检测液体乳中单增李斯特菌活菌的方法

摘要

一种快速检测液体乳中单增李斯特菌活菌的方法，涉及一种检测液体乳中单增李斯特活菌的方法。它解决了现有LAMP检测方法不能有效区分死菌和活菌、传统的液体乳中致病菌检测方法存在检测时间长，检测成本高的问题。方法：受检乳样的前处理；样品DNA的提取；LAMP扩增；鉴定，即完成检测。本发明方法耗时较短，检测灵敏度高，约1.5小时即可完成，大大缩短了检测时间，可以显著减少原料乳加工前和成品出厂前的等待检测结果的储藏时间。对液体乳中单增李斯特菌活菌的检出限为6.37×101cfu/mL。可广泛应用于食源性致病菌检测领域。

主权项

一种快速检测液体乳中单增李斯特菌活菌的方法，其特征在于快速检测单增李斯特菌活菌的方法，按以下步骤进行：一、受检乳样的前处理：向1mL受检乳中加入PMA，使PMA的浓度为50μmol/L，然后置于暗处放置5～30min，接着置于距650W卤素灯15～20cm处，曝光5～30min；二、样品DNA的提取：向步骤一处理后的受检乳中加入150μL浓度为250g/L的柠檬酸钠和100μL浓度为1mol/L的氢氧化钠，然后于10000r/min离心2min，弃上清，得沉淀；三、用质量浓度为0.85％的生理盐水洗涤沉淀，然后于10000r/min离心1min，弃上清，用细菌基因组DNA提取试剂盒进行DNA提取，得提取物；四、以提取物作为模板进行LAMP扩增，得到LAMP扩增产物；五、鉴定：取5μL LAMP扩增产物，点样于质量浓度为2％的琼脂糖凝胶中，以100V电压在1×TAE电泳缓冲液中电泳30min，然后在凝胶成像系统中成像，即完成检测。