[发明专利]利用流加和分段补料的方式发酵生产果聚糖

摘要

本发明涉及一种利用流加和分段补料的方式发酵生产果聚糖的方法，实施步骤如下：（1）孢子菌悬液的制备；（2）将上述孢子菌悬液用于接种至灭菌后的液体种子培养基中，得到液体种子；（3）将上述液体种子用于接种至灭菌后的5L发酵罐中，按照体积比5-12%的接种量将液体种子接入上述冷却的发酵罐培养基中，发酵温度30-40℃，溶氧控制在30-40%；（4）在发酵10-15个小时后，连续以1.67ml/min的速度匀速流加浓度为30%-50%的蔗糖；或分段补料，发酵时间为24-36小时；（5）发酵结束后，将发酵液6000转/分钟离心15分钟除菌体，取上清液过分子量6000-8000道尔顿超滤膜，截留液浓缩喷粉，得到果聚糖(levan)的产量为200-600g。本发明工艺简单，成本低，效果非常显著。

主权项

一种利用流加和分段补料的方式发酵生产果聚糖的方法，其特征在于实施步骤如下： （1）孢子菌悬液的制备：将地衣芽孢杆菌TJZKBA10658接种到培养基斜面上，于30℃恒温培养2‑4天，加入质量浓度为0.75%的生理盐水洗涤菌丝体，获得孢子菌悬液，悬液中孢子含量约为105‑106个，待用；斜面培养基组成包括，单位1L：葡萄糖2g、酵母粉5g、蛋白胨10g、琼脂15g，用蒸馏水定容至1L，pH值7.0；其中所用菌种：地衣芽孢杆菌TJZKBA10658；（2）将上述孢子菌悬液用于接种至灭菌后的液体种子培养基中，液体种子培养基组成包括，单位1L：蔗糖20‑60g、酵母粉4‑8g、蛋白胨5‑10g，用蒸馏水定容至1L，pH值7.0；将液体种子培养基于121℃、15分钟灭菌再冷却；然后按照体积百分比5‑12%的接种量将孢子菌悬液接入上述冷却的液体种子培养基中，500ml规格的摇瓶装液量是100ml，摇瓶于30‑40℃、转速为120‑200rpm的摇床上培养24小时，得到液体种子；（3）将上述液体种子用于接种至灭菌后的5L发酵罐中，发酵罐培养基组成包括，单位1L：蔗糖50‑100g、 酵母粉4‑8g、蛋白胨5‑10g；MgSO4 0.1‑0.4g、NaCl 0.5‑2.0g、K2HPO4 2‑4g、KH2PO4 2‑4g ，MnSO4 0.2‑1g，FeCl2 0.2‑1g，用蒸馏水定容至3L，pH值5.0‑8.0，将发酵罐培养基于121℃、15分钟灭菌再冷却；然后按照体积比5‑12%的接种量将液体种子接入上述冷却的发酵罐培养基中，发酵温度30‑40℃，溶氧控制在30‑40%；（4）在发酵10‑15个小时后，连续以1.67ml/min的速度匀速流加浓度为30%‑50%的蔗糖；或分段补料，每次补300ml浓度为40‑60%的蔗糖，间隔3‑4个小时补一次，发酵时间为24‑36小时；（5）发酵结束后，将发酵液6000转/分钟离心15分钟除菌体，取上清液过分子量6000‑8000道尔顿超滤膜，截留液浓缩喷粉，得到果聚糖levan的产量为200‑600g。