[发明专利]固态发酵矛尾刺虾虎鱼肌肉蛋白制备抗氧化多肽的方法

摘要

本发明公开了一种利用米曲霉固态发酵矛尾刺虾虎鱼肌肉蛋白制备抗氧化多肽的方法，属于水产品加工及微生物生物技术交叉领域。本发明以矛尾刺虾虎鱼肌肉为原料，采用匀浆机将新鲜鱼肌肉匀浆，80℃水浴保温20min，10℃，8000g离心20min，除去上层油脂，80℃烘干。干燥样品与蛭石混合均匀，调整好水分含量、pH，接种米曲霉进行固态发酵。发酵结束后，加蒸馏水浸泡、搅拌、过滤，滤液浓缩后可得肌肉多肽。本发明提供的矛尾刺虾虎鱼肌肉蛋白多肽有良好的抗氧化功能，本发明方法工艺参数设计合理，可操作性强，无需使用成品蛋白酶，成本低，能够充分利用矛尾刺虾虎鱼资源，具有良好的潜在经济效应。

主权项

一种微生物固态发酵矛尾刺虾虎鱼肌肉蛋白制备抗氧化多肽的方法，其特征在于，它采用固态发酵形式，其具体步骤如下：（1）矛尾刺虾虎鱼肌肉蛋白的制备：取新鲜矛尾刺虾虎鱼，除去鱼鳞、鱼皮、内脏，清洗干净，匀浆机匀浆，匀浆液80℃水浴保温20min，使内源酶失活；10℃，8000g 离心20min，除去上层油脂后，置80℃烘干，得干燥肌肉蛋白；（2）制备发酵基质：将干燥肌肉蛋白和直径为1.0‑1.5 mm蛭石按照重量比 60:40混合搅拌混匀，用pH 7.5, 0.2M的磷酸缓冲液调节含水率至55%，得发酵基质，按V/V 50%将发酵基质装于三角瓶中115℃灭菌20min备用； （3）微生物固态发酵：将米曲霉Aspergillus oryzae菌种在PDA斜面培养基上活化，从活化后的菌种斜面上挑取孢子接种至PDA液体培养基，30℃、120rpm 培养至菌体浓度达到107CFU/ml，得种子液；按V/W 5%接种量将种子液接种于灭菌过的发酵基质，30℃，发酵4d；（4）分离：发酵结束后，加蒸馏水浸泡、搅拌、过滤，滤清液即为抗氧化多肽，或者将滤清液浓缩干燥制粉，得抗氧化多肽粉。