[发明专利]一种组织工程化神经组织及其构建方法

摘要

本发明公开了属于组织工程与再生医学技术领域的一种组织工程化神经组织及其构建方法。该组织工程化神经组织以传代、纯化培养的神经干细胞作为种子细胞，以液态I型胶原和Matrigel基质作为支架材料，种子细胞与支架材料体外复合后进行培养。本发明采用的支架体系能够有效地维持神经干细胞的存活与增殖，促进神经干细胞的分化，形成由分化成熟神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞构成的工程化神经组织。本发明对于未来临床利用组织工程化神经组织移植治疗神经系统损伤具有重要意义，同时也可以作为神经发育、脑外伤以及神经电生理研究的体外模型。

主权项

一种组织工程化神经组织的构建方法，其特征在于，按照如下操作步骤进行：(1)制备神经干细胞悬液从已死亡的Wistar小鼠大脑皮层组织中分离得到神经干细胞，传代纯化培养，然后用DMEM培养液重悬细胞制备细胞密度为1×106～1×108的神经干细胞悬液；(2)胶原/Matrigel支架材料的制备将胶原与10×DMEM混匀，并用NaOH调节其pH值至7.2 7.4，然后加入Matrigel，充分混匀，此操作过程在冰上进行；(3)细胞与支架材料的复合及细胞 支架材料复合物的培养将步骤(1)制得的细胞悬液与步骤(2)制得的胶原/Matrigel支架材料混合，其中胶原的终浓度为0.4 1mg/mL，支架材料中Matrigel所占的体积分数为10％ 80％；然后将获得的细胞 支架材料复合物加至培养板中，置于5％CO2、37℃的培养箱中培养30min，待细胞 支架材料凝胶化后再加入含生长因子的DMEM F12培养基，培养14天，即得到组织工程化神经组织。