[发明专利]一种控制家蚕蛹期发育的方法

摘要

本发明属于基因工程领域，具体涉及一种转基因家蚕通过UAS/GAL4双元系统控制家蚕蛹期发育的方法：以piggyBAC转座子载体pigA3GFP为基础载体，通过基因工程操作构建家蚕茧蛋白酶基因启动子（PDP）控制GAL4基因表达的转基因家蚕PDP－GAL4系统；通过基因工程操作构建UAS启动子控制家蚕杆状病毒egt基因或蝎毒素BmKIT3R基因表达的转基因家蚕UAS－egt或UAS－BmKIT3R系统；PDP－GAL4系统与UAS－egt系统或UAS－BmKIT3R系统杂交，F1代幼虫期发育正常、蛹期延长7－10天。本发明方法通过GAL4/UAS双元系统实现了利用家蚕杆状病毒egt基因和BmKIT3R延长F1代蚕蛹蛹期，增加了蚕茧收购和缫丝工艺的灵活性，具有重要的实施价值。

主权项

一种控制家蚕蛹期发育的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1) 通过基因工程操作将家蚕茧蛋白酶基因启动子PDP控制下的GAL4基因克隆进piggyBAC转座子载体pigA3GFP，构建重组转基因载体A，与辅助质粒混合，导入初产卵，孵化后的蚁蚕通过常规筛选获得带有荧光蛋白报告基因的家蚕，检测到GFP和GAL4基因，育种制成转基因家蚕PDP－GAL4系统；通过基因工程操作将UAS启动子控制下的家蚕杆状病毒egt基因或蝎毒素BmKIT3R基因克隆进piggyBAC转座子载体pigA3GFP，构建重组转基因载体B，与辅助质粒混合，导入初产卵，孵化后的蚁蚕通过常规筛选获得带有荧光蛋白报告基因的家蚕，检测到外源基因，育种制成转基因家蚕UAS－egt或转基因家蚕UAS－BmKIT3R系统；(2) 将育种制成的转基因家蚕PDP－GAL4系统与转基因家蚕UAS－egt系统或转基因家蚕UAS－BmKIT3R系统杂交，获得家蚕的F1代幼虫，所得家蚕的F1代幼虫期发育正常，蛹期延长7－10天。