[发明专利]一种转基因序列NOS终止子的可视化检测方法

摘要

一种转基因序列NOS终止子的可视化检测方法，属于生化分析化学领域。本发明公开了一种使用非标记的胶体金检测转基因序列NOS终止子的快速可视化的检测方法。本方法利用NOS终止子的探针序列在一定浓度的盐溶液中具有稳定胶体金的作用，而探针序列和目标序列杂交以后，不能稳定胶体金溶液，引起胶体金聚集，从而呈现出颜色的变化。本方法包括以下步骤：(1)制备胶体金，对胶体金进行电镜表征；(2)优化NOS终止子探针序列稳定胶体金的浓度；(3)NOS终止子探针序列和不同浓度目标序列杂交；(4)含不同浓度目标序列的胶体金聚集变色；(5)干扰测定。本发明的检测方法快速、简单、廉价、准确，适用于NOS终止子的检测。

主权项

一种转基因序列NOS终止子的可视化检测方法，其包括以下步骤：(1)胶体金的制备：取0.5ml浓度为0.048mol/L的氯金酸溶液加入250ml三口烧瓶中，再加入100ml去离子水，加热至沸腾，回流15分钟，加入1ml 1％的二水合柠檬酸三钠，继续回流搅拌12分钟，冷却至室温，放入暗处4℃保存；(2)探针浓度优化：将探针序列用0.02mol/L pH为7.4的磷酸缓冲液溶解，配制浓度为1×10‑4mol/L的探针溶液，将探针溶液进行10倍倍比稀释，分别取1mL胶体金溶液、25μL不同浓度的探针溶液、50μL 0.5mol/L的NaCl溶液，在玻璃瓶中混匀，10分钟后观察颜色变化，确定NOS终止子探针序列稳定胶体金的最优浓度；(3)NOS终止子探针和目标序列杂交：将目标序列和干扰序列用0.02mol/L pH为7.4的磷酸缓冲液溶解，得到浓度为1×10‑4mol/L的目标序列溶液和干扰序列溶液，将目标序列进行10倍倍比稀释，干扰序列稀释至1×10‑6mol/L，在EP管分别加入50μL最优浓度的探针溶液、等体积的不同浓度的目标序列，使NOS终止子探针序列和不同浓度目标序列杂交，另取一个EP管分别加入50μL探针溶液和干扰序列；(4)胶体金聚集变色：在EP管中加入1mL胶体金溶液，分别移取步骤(3)中的杂交好的DNA(探针‑目标序列溶液)和探针‑干扰序列溶液25μL，加入胶体金溶液混匀，再向各管中分别加入50μL 0.5mol/L的氯化钠溶液，5分钟后观察颜色，检测含不同浓度目标序列的胶体金聚集变色，并进行干扰测定。