[发明专利]一种使单态性SSR标记转变为多态性标记的方法

摘要

本发明属于棉花分子育种技术领域，具体是一种使单态性SSR标记转变为多态性标记的方法。它包括以下步骤：(1)8％非变性聚丙烯酰胺凝胶的制备，丙烯酰胺与甲叉双丙烯酰胺的比例为25-30∶1，10x??TBE??100ml，然后用蒸馏水定容至1L；(2)常规电泳条件下单态性SSR引物对作图群体两亲本的PCR扩增，PCR反应体系(10ul)为：DNA模板25ng，1x??Buffer，2.0mmol??L-1??MgCl2，0.25mmolL-1??dNTPs，0.2μmol??L-1??primer，0.8U??Taq??DNA聚合酶，不足部分用无菌的双蒸水补齐；(3)扩增产物在8％非变性聚丙烯酰胺凝胶上的电泳；(4)产生多态性的SSR引物。本发明的方法费用低廉、操作简捷、适用范围广泛，是有效使单态性SSR标记产生多态性的方法，极大地提高了SSR标记的利用效率。

主权项

一种使单态性SSR标记转变为多态性标记的方法，它包括以下步骤：(1)8％非变性聚丙烯酰胺凝胶的制备，丙烯酰胺与甲叉双丙烯酰胺的比例为25 30∶1，10x TBE 100ml，然后用蒸馏水定容至1L；(2)常规电泳条件下单态性SSR引物对作图群体两亲本的PCR扩增，PCR反应体系(10ul)为：DNA模板25ng，1x Buffer，2.0mmol L 1 MgCl2，0.25mmolL 1 dNTPs，0.2μmol L 1primer，0.8U Taq DNA聚合酶，不足部分用无菌的双蒸水补齐；PCR扩增程序为：95℃预变性5min；94℃变性50sec、56℃复性45sec、72℃延伸60sec，34个循环；最后72℃延伸5min；(3)扩增产物在8％非变性聚丙烯酰胺凝胶上的电泳，常温条件下15W恒功率电泳3 5h；(4)产生多态性的SSR引物。