[发明专利]山羊痘正向间接血凝诊断试剂的制备方法及检测方法

摘要

本发明公开了一种能够检测山羊痘抗体的山羊痘正向间接血凝诊断试剂及其制备方法、检测方法。制备方法为：以戊二醛和绵羊红细胞混合制备红细胞悬液，与等量的纯化山羊痘病毒混合，经搅拌、离心、洗涤，用含1%新生犊牛血清的PBS配成1%致敏红细胞，即制成为山羊痘正向间接血凝诊断试剂。经优化的制备条件是：采用戊二醛单醛化法固定红细胞，致敏红细胞浓度0.8%～1.0%，抗原含量控制在20μg.mL-1～200μg.mL-1之间，可以达到较好的致敏效果；检测方法按常规正向间接血凝试验方法进行，反应温度20～25℃，反应时间50min。该方法具有较好的特异性、敏感性和可重复性，可用于兽医临床上山羊痘抗体快速检测。

主权项

一种山羊痘正向间接血凝诊断试剂的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：第一，无菌采集健康绵羊静脉血，加10倍量PBS，2 000转/分离心15分钟, 洗5遍，以0.1M pH 7.4～7.8磷酸缓冲液配成2.5%的红细胞悬液；第二，将步骤一制得的红细胞悬液与1%戊二醛以9:1体积比混合，于室温下缓慢搅拌1h，2000 转/分离心15分钟，用磷酸缓冲液洗5遍，制得醛化红细胞；第三，将步骤二制得的上述醛化红细胞沉淀物溶于10倍量的磷酸缓冲液中，再与等量纯化山羊痘病毒混合,置于室温条件下搅拌2小时，2000转/分离心15分钟，制得致敏红细胞；所使用的纯化山羊痘病毒抗原含量控制在20μg/mL～200μg/mL之间；第四，将步骤三制得的致敏红细胞沉淀物用含0.1% NaN3 、1%新生犊牛血清的磷酸缓冲液洗涤5次，并搅拌混合，配成0.8%～1%致敏红细胞；第五，分析检测合格即制得正向间接血凝诊断试剂。