[发明专利]一种热纤梭菌高密度培养的方法

摘要

本发明属于微生物发酵工程领域，具体是一种热纤梭菌高密度培养的方法。其特征是以GS-2培养基为初始培养基，通过多元数理统计方法优化发酵培养基，快速高效的提高热纤梭菌的菌体浓度。本发明的优点在于提供了一种快速获取热纤梭菌大量菌体浓度的发酵培养基，为后续生产转化纤维素为生物乙醇效率特别高的纤维小体做铺垫。本发明所得热纤梭菌的菌体密度比初始培养基提高6～9倍，瓶装条件下OD600达到8.85，发酵罐中OD600达到12.7。

主权项

一种热纤梭菌高密度培养的方法，其特征是以GS‑2培养基为初始培养基，通过高温，厌氧发酵，在反应器中实现热纤梭菌的高密度培养。主要包括以下步骤：1)菌种热纤梭菌(Clostridium thermocellum)JYT012)培养基的制备种子液培养基为：KH2PO4 1.5g/L，K2HPO4(anhydrous)2.9g/L，氮源2.1g/L，MgCl2·6H2O 1.0g/L，CaCl2·2H2O 150mg/L，FeSO4·6H2O 1.25mg/L，Cysteine hydrochloride 1.0g/L，Resazurin 2.0mg/L，碳源5.0g/L，Morpholinopropane sulfonic acid(MOPS)10.0g/L，Yeast extract 6.0g/L，Sodium citrate·2H2O 3.0g/L配制发酵培养基，初始pH为7.4。高密度发酵培养基配方：KH2PO4 1.2g/L，K2HPO4(anhydrous)6.0g/L，氮源5.0g/L，MgCl2·6H2O 2.49g/L，CaCl2·2H2O 150mg/L，FeSO4·6H2O 1.25mg/L，Cysteine hydrochloride 2.0g/L，Resazurin 2.0mg/L，碳源20.0g/L，Morpholinopropane sulfonic acid(MOPS)10.0g/L，Yeast extract 12.0g/L，Sodium citrate·2H2O 0.752g/L配制发酵培养基，并灭菌。灭菌前调节pH为8.0。3)接种将培养好的种子液按1∶20‑1∶60(V∶V)比例接入厌氧瓶或发酵罐中。4)培养温度50‑70℃，厌氧，罐或瓶压为‑0.1MPa～0.1MPa，搅拌转速为60‑100rpm。高底物浓度(碳源浓度大于15g/L)发酵时应控制pH为6.0‑8.0。培养时间为12h‑48h。