[发明专利]磷化蛋白的电化学免疫传感器

摘要

一种磷化蛋白电化学免疫传感器。它以磁纳米-抗体复合物MPs-p5315Ab1为吸附剂分离磷化蛋白，以纳米碳球CNS为载体并在其表面修饰磷酸铅-去铁铁蛋白LPA和磷化蛋白抗体p5315Ab2，制备LPA-p5315Ab2-CNS纳米复合剂，用于检测信号放大。根据夹心免疫分析原理，待测磷化蛋白含量与捕获到的LPA-p5315Ab2-CNS成正比，根据溶出伏安法检测LPA中包裹的铅离子含量来测定样品中磷化蛋白浓度的。此方法优点：操作简便，分离简单高效，整个免疫反应在EP管中完成；以CNS为载体引入大量信号分子LPA，每个LPA分子中含有大量的Pb2+，因此提高了检测灵敏度；直接将溶解的Pb2+作为检测信号，无需加入酶底物，为无试剂传感器。本磷化蛋白电化学免疫传感器，磷化蛋白phospho-p5315的线性浓度范围为0.02～20ng??mL-1，检出限为0.01ng??mL-1。

主权项

磷化蛋白phospho p5315的电化学免疫检测方法，其特征在于，方法步骤如下：1)、免疫反应：分别取25μL MPs p5315Ab1放置于10个容积1.5mL的塑料离心管中，然后在上述10个塑料离心管分别加入25μL浓度为0.02ng/mL，0.05ng/mL，0.1ng/mL，0.2ng/mL，0.5ng/mL，1.0ng/mL，2.0ng/mL，5.0ng/mL，10ng/mL，20ng/mL的phospho p5315，在磁力搅拌器上搅拌反应50分钟后，磁性分离；用PBS缓冲溶液反复洗涤后，再分别加入50μL的LPA p5315Ab2 CNS，反应40分钟，磁性分离和洗涤3遍；2)、阳极溶出伏安测定：通过检测步骤1)中磷酸铅 去铁铁蛋白LPA中包裹的Pb2+的阳极溶出信号，测定样品中磷化蛋白phospho p5315的含量。