[发明专利]重组蛋白酶与分子伴侣共表达制备酶的方法无效
| 申请号： | 201110202229.X | 申请日： | 2011-07-19 |
| 公开（公告）号： | CN102250846A | 公开（公告）日： | 2011-11-23 |
| 发明（设计）人： | 冉晓园;闫敏;刘程;王爽 | 申请（专利权）人： | 上海近岸科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/02 | 分类号： | C12N9/02;C12N15/70;C12R1/19 |
| 代理公司： | 上海浦一知识产权代理有限公司 31211 | 代理人： | 王函 |
| 地址： | 201203 上海市浦东新区*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明公开一种重组蛋白酶与分子伴侣共表达制备酶的方法，将编码甲醛脱氢酶及甲醛氧化物歧化酶的重组质粒分别转化含分子伴侣共表达质粒的表达菌株，使蛋白酶与分子伴侣共表达，获得了蛋白酶的可溶重组表达(含组氨酸标签或不含组氨酸标签)。本发明将甲醛脱氢酶及甲醛氧化物歧化酶与组氨酸标签融合表达，可溶重组蛋白，经组氨酸标签亲和纯化可获得蛋白纯度大于90％，平均收获1克菌体能够纯化获得约1毫克的蛋白酶。本发明在组氨酸标签与蛋白酶之间引入肠激酶酶切序列，可有效酶切去除标签，无载体氨基酸残留。该方法可促进蛋白酶在大肠杆菌表达体系中的可溶表达，并能够高效纯化制备大量重组蛋白酶。 | ||
| 搜索关键词： | 重组 蛋白酶 分子 伴侣 表达 制备 方法 | ||
【主权项】：
一种重组蛋白酶与分子伴侣共表达制备酶的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)基因合成蛋白酶的核苷酸序列，获得目的基因；所述蛋白酶为甲醛脱氢酶和甲醛氧化物歧化酶；(2)表达载体构建：将经基因合成获得的目的基因序列，以NdeI和HindIII酶切位点克隆到以相同的两个酶双酶切的pCold载体中；(3)重组蛋白酶在含分子伴侣共表达质粒的大肠杆菌pG‑Tf2表达菌株中的表达：转化表达载体到大肠杆菌pG‑Tf2，并进行诱导表达重组蛋白酶；(4)重组蛋白酶的纯化。
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