[发明专利]一种骨靶向药物天冬氨酸六肽丹参素的合成方法及其医疗用途

摘要

本发明公开了一种骨靶向药物天冬氨酸六肽丹参素的合成方法，以及其医疗用途，特别是在防治骨质疏松的应用，属于药物制造的技术领域，六肽丹参素的合成方法是将丹参素结构中含有的羧基与天冬氨酸六肽的N端以酰胺键结合得化合物天冬氨酸六肽‑丹参素；本发明制备的天冬氨酸六肽‑丹参素可靶向作用于骨组织，使骨组织微血管扩张，促进骨的微循环，同时，可以使骨髓基质干细胞向成骨分化，促进成骨细胞形成，增加骨的合成，明显地预防骨质疏松，是临床预防和治疗骨质疏松的良药。进一步的研究发现，这种六肽丹参素由于其在体内不易被氧化，在血液中维持时间较久，还有许多医疗用途，这些医疗用途包括预防和治疗心肌梗死，冠心病，动脉粥样硬化，高血脂，肝损伤，抗脑缺血损伤和抗肿瘤。

主权项

1.一种将丹参素结构中含有的羧基与天冬氨酸六肽的N端以酰胺键结合得化合物天冬氨酸六肽‑丹参素的合成方法，其特征是采用多肽固相合成法先合成天冬氨酸六肽载体，采用9‑芴甲氧羰基保护α‑氨基，用20％哌啶/N,N‑二甲基甲酰胺脱除，使用含有侧链保护的9‑芴甲氧羰基‑天冬氨酸(叔丁氧基)‑OH为合成原料；氨基酸羧基端先与Wang树脂的羟基位成酯连接后，肽链从C端向N端延伸，得到线型肽树脂后，再脱除氨基保护基，将丹参素的羧基端与肽链的N端缩合后，用含有95％三氟乙酸的切割剂割去树脂和侧链保护剂，经冰乙醚沉淀后即得到目标化合物粗品，其合成路线包括下述步骤：(1)9‑芴甲氧羰基‑天冬氨酸(‑叔丁氧基)‑O‑Wang树脂的合成1)树脂的溶胀：称取Wang树脂于预先经二氯甲烷处理的反应器中，用二氯甲烷溶胀过夜，使树脂充分溶胀，便于反应能够较完全进行，分别用二氯甲烷及N,N‑二甲基甲酰胺洗涤树脂，真空泵抽干；2)9‑芴甲氧羰基保护基团的脱除：配置20％哌啶/N,N‑二甲基甲酰胺脱除剂，为了能充分脱除9‑芴甲氧羰基基团，采用两次脱除法；第一次：脱除时间15min，试剂用量15mL/g树脂；第二次，脱除时间15min，试剂用量15mL/g树脂；3)洗涤：依次用N,N‑二甲基甲酰胺×1，二氯甲烷×5、N,N‑二甲基甲酰胺×1进行洗涤，每次氮气鼓吹搅拌1min；4)缩合反应：将准确称取4倍树脂担载量当量的9‑芴甲氧羰基‑天冬氨酸(‑叔丁氧基)‑OH和2倍树脂担载量当量的HOBt放入烧杯中，加入45％N,N‑二甲基甲酰胺/四氢呋喃磁力搅拌，溶解后，置于冰浴中，缓慢加入2倍当量的N,N'‑二异丙基碳二亚胺，搅拌反应活化20分钟；然后将此活化酯溶液倒入盛有Wang树脂的反应器中，反应器在加入树脂前用二氯甲烷处理；再加0.3倍树脂担载量当量的4‑二甲氨基吡啶，室温下通入氮气反应6小时；反应结束后用N,N‑二甲基甲酰胺洗3次，加入二氯甲烷、乙酸酐和二乙胺后，室温反应30分钟以封闭未被酯化的羟基；抽干，用N,N‑二甲基甲酰胺、二氯甲烷、MeOH分别洗涤三次，真空干燥树脂；(2)9‑芴甲氧羰基‑天冬氨酸(叔丁氧基)‑[天冬氨酸(叔丁氧基)]4‑天冬氨酸(叔丁氧基)‑O‑Wang树脂的合成1)反应前树脂的溶胀处理：准确称取上所得氨基酸树脂加入反应器中，加入10mL二氯甲烷浸泡，封闭过夜，使树脂充分溶胀，真空抽去溶剂，用N,N‑二甲基甲酰胺×2洗涤1分种，抽干；2)脱除9‑芴甲氧羰基氨基保护基：方法同(1)步骤的2)；3)洗涤：方法同(1)步骤的3)；4)肽键的形成：称取以树脂上氨基酸物质的量为基准的3倍过量的苯并三氮唑‑N,N,N',N'‑四甲基脲六氟磷酸酯、3倍过量的1‑羟基‑苯并‑三氮唑，磁力搅拌下加入N,N‑二甲基甲酰胺溶解，再加入3倍过量的9‑芴甲氧羰基‑天冬氨酸(叔丁氧基)‑OH溶解，室温搅拌活化30分钟，加入到脱除Fmoc氨基保护树脂中；量取6倍过量的N,N‑二异丙基乙胺，通入氮气室温下反应，直到茚三酮检测显示反应完全为止，依次用二氯甲烷，N,N‑二甲基甲酰胺洗涤；重复步骤2)和3)，直至六肽皆连接上；用N,N‑二甲基甲酰胺、二氯甲烷、MeOH分别洗涤三次，真空干燥六肽树脂；(3)天冬氨酸六肽丹参素的合成1)反应前树脂的溶胀处理：准确称取上所得六肽树脂加入到烧瓶中，用10mL二氯甲烷浸泡过夜，使树脂充分溶胀，真空抽去溶剂，用3mLN,N‑二甲基甲酰胺×2洗涤，抽干；2)脱除9‑芴甲氧羰基氨基保护基：方法同(1)步骤的2)；3)洗涤：方法同(1)步骤的3)；4)肽键的形成：准确称取与树脂上肽的物质的量为基准等量的丹参素，再称取与树脂上肽的物质的量等量的苯并三氮唑‑N,N,N',N'‑四甲基脲六氟磷酸酯和1‑羟基‑苯并‑三氮唑，经N,N‑二甲基甲酰胺溶解后，一起加入到脱除9‑芴甲氧羰基肽保护树脂中，量取加入2倍过量的N,N‑二异丙基乙胺，通入氮气室温下反应，用N,N‑二甲基甲酰胺、二氯甲烷、MeOH分别洗涤三次，除去溶剂后，树脂直接于反应器中放置真空干燥箱中干燥；5)脱除侧链保护及树脂：取出反应器，氮气鼓吹下，加入体积比例为95/2.5/2.5的三氟乙酸/三异丙基硅烷/水的冰的切割剂,室温下反应2小时，反应结束后，抽滤，收集滤液，用少量三氟乙酸洗树脂三次，合并滤液，加入大量无水冰乙醚，离心、洗涤三次，收集沉淀；沉淀经真空干燥，即得合成的天冬氨酸六肽丹参素产品。