[发明专利]一种克服剑麻组织培养苗玻璃化现象的方法

摘要

本发明涉及一种克服剑麻组织培养苗玻璃化现象的方法，该方法是在离体条件下，利用剑麻茎尖为外植体经过表面消毒后，接种到添加有6-BA的改良SH培养基上进行初代培养约45天，然后将无菌外植体接种到含有6-BA的改良SH培养基上进行诱导分化和培养，诱导出的丛芽应用诱导分化相同的培养基每45天进行继代增殖，经过生根培养可获得大量健康种苗；该方法通过调节培养基的有效组分来控制组培苗玻璃化现象，方法简便、经济、高效，常见剑麻品种用此法生产组培苗均能有效克服玻璃化现象，具有广阔的应用前景。

主权项

一种克服剑麻组织培养苗玻璃化现象的方法，其特征在于：包括如下步骤：(1)外植体表面消毒及培养以剑麻珠芽苗或吸芽苗的茎尖为材料进行消毒，先将外层老叶剥离，流水冲洗，用0.3%高锰酸钾溶液处理30min，接着在超净工作台上用75%酒精处理1min，再用0.1%氯化汞溶液处理15‑30 min，最后用无菌水冲洗3‑5次，晾干后纵切，接种于改良SH+6‑苄氨基腺嘌呤6‑BA2.5‑5.0mg/L培养基上进行初代培养40‑50天；培养条件为每天光照12‑14小时，暗培养10‑12小时，光照强度2000lux，培养温度为28±2℃；(2) 丛芽诱导和增殖培养将经初代培养的茎尖转入丛芽诱导与增殖培养基上进行丛芽诱导和增殖，丛芽诱导与增殖培养基为改良SH培养基，添加外源激素为6‑苄氨基腺嘌呤6‑BA、萘乙酸NAA和吲哚3丁酸IBA；6‑BA的浓度为1.0‑5.0mg/L； NAA的浓度为0‑1.5mg/L，IBA的浓度为0‑1.0mg/L ，pH为5.8‑6.0；光照12‑14h， 黑暗10‑12h，光照为2000Lx，温度28±2℃；（3）生根培养    经丛芽诱导、增殖培养并壮苗后，将高5cm以上，带有4‑5片叶的小苗转入生根培养基进行生根培养，生根基本培养基为改良SH，添加外源激素为吲哚3丁酸IBA，激素浓度为0.5‑2.5 mg/L， pH为5.8‑6.0；光照12‑14h， 黑暗10‑12h，温度28±2℃；(4) 无菌苗移栽待植株生根2‑3周，小苗长出3‑5条壮根时，将瓶苗置于自然条件下炼苗1周，然后取出洗去基部的培养基，用高锰酸钾1000倍液浸泡3min，移植到基质为椰糠和河沙的塑料遮光大棚中培育，遮光度75%以上，白天最高温度不超过32℃，夜晚最低温度不低于20℃，每天早晚各浇透水1次，植株的成活率在95%以上；幼苗长出新叶后开始追施2%复合肥水肥，施肥后要立即用清水淋洗小苗叶片，待幼苗长出新叶3片、苗高10cm左右即可移栽到自然环境下继续培育。