[发明专利]高活力磷脂酶D及细胞表面展示磷脂酶D酵母全细胞催化剂的制备有效
| 申请号： | 201110206481.8 | 申请日： | 2011-07-22 |
| 公开（公告）号： | CN102286440A | 公开（公告）日： | 2011-12-21 |
| 发明（设计）人： | 路福平;刘逸寒;薄嘉鑫;王春霞;王建玲 | 申请（专利权）人： | 天津科技大学 |
| 主分类号： | C12N9/16 | 分类号： | C12N9/16;C12N15/55;C12N1/19;C12N15/81;C12R1/84 |
| 代理公司： | 天津盛理知识产权代理有限公司 12209 | 代理人： | 王来佳 |
| 地址： | 300457 天津市滨*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种高活力磷脂酶D及细胞表面展示磷脂酶D酵母全细胞催化剂的制备，属于用重组DNA技术定点突变野生型磷脂酶D，以改善其活性，并将突变后基因与酵母展示载体pPIC9K-Flo连接，将其在毕赤酵母细胞表面高效展示的方法，涉及具有高活力磷脂酶D及表面展示磷脂酶D酵母全细胞催化剂的制备方法。本发明提高了野生型磷脂酶D的活力，并将其展示在酵母细胞表面，提高其稳定性，具有固定化酶的优点。其技术方案是从微生物特别是色褐链霉菌中分离野生型磷脂酶D基因，对其Glu69、Ser285的氨基酸残基进行突变，经在毕赤酵母细胞表面高效表达，检测高活力磷脂酶D酶活较野生型磷脂酶D提高11％，重组菌株GS115/pPIC9K-Flo-pldm高密度发酵制备的全细胞催化剂酶活为120U/(g·干细胞)。 | ||
| 搜索关键词： | 活力 磷脂酶 细胞 表面 展示 酵母 催化剂 制备 | ||
【主权项】：
一种高活力磷脂酶D，其特征在于：高活力磷脂酶D的氨基酸序列是通过分别使如序列7的核苷酸序列编码的野生型磷脂酶D氨基酸序列中Glu69、Ser285的氨基酸位点替换，得到如序列8的核苷酸序列，序列8经在毕赤酵母细胞表面高效表达后获得高活力磷脂酶D。
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