[发明专利]一种柑橘的基因瞬时表达方法无效
| 申请号： | 201110211961.3 | 申请日： | 2011-07-27 |
| 公开（公告）号： | CN102337291A | 公开（公告）日： | 2012-02-01 |
| 发明（设计）人： | 戴素明;李芳;李大志;邓子牛 | 申请（专利权）人： | 湖南农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/82 | 分类号： | C12N15/82 |
| 代理公司： | 长沙星耀专利事务所 43205 | 代理人： | 宁星耀 |
| 地址： | 410128 湖*** | 国省代码： | 湖南;43 |
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| 摘要： | 一种柑橘的基因瞬时表达方法，包括以下步骤：（1）将公知的含有外源基因的植物表达载体导入农杆菌EHA105中，再将含有植物表达载体的农杆菌EHA105接种于YEB培养基中，振荡培育16小时，使农杆菌EHA105生长达到对数生长期；（2）离心收集菌体并悬浮于缓冲液中，调整农杆菌EHA105菌液浓度OD值为0.1～1.2，28℃静置2小时，取1mL一次性注射器，去掉针头吸取农杆菌菌液待用；（3）在柑橘植株上选取刚转绿的成熟叶片，用针头将叶片背面表皮刺破，将注射器管口顶住叶片刺破处并推动，将菌液从破损处渗入叶片并扩展到全叶片。本发明操作方便，无需组织培育过程而不受再生效率、转化效率低的限制，能快速使外源基因在柑橘体内表达。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 柑橘 基因 瞬时 表达 方法 | ||
【主权项】：
一种柑橘的基因瞬时表达方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）农杆菌培养：将公知的含有外源基因的植物表达载体pBI 121、pCAMBIA 1301或pCAMBIA 2301导入公知的农杆菌EHA105中，再将含有植物表达载体pBI 121、pCAMBIA 1301或pCAMBIA 2301的农杆菌EHA105按0.5％（V/V）的比例接种于YEB培养基中，在28℃、220rpm条件下振荡培育16小时，使农杆菌EHA105生长达到对数生长期；（2）菌体收集：离心收集菌体并悬浮于缓冲液中，调整农杆菌EHA105菌液浓度OD值为0.1～1.2，28℃静置2小时，取1mL一次性注射器，去掉针头吸取农杆菌菌液待用；（3）注射菌液：在柑橘植株上选取刚转绿的成熟叶片，先用针头将叶片背面表皮刺破，将注射器管口顶住叶片刺破处并推动，将菌液从破损处渗入叶片并扩展到全叶片。
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