[发明专利]一种山莴苣素和山莴苣苦素的制备方法

摘要

本发明涉及一种山莴苣素和山莴苣苦素的制备方法，该方法采用高速逆流色谱法通过两个分离步骤从毛菊苣中得到山莴苣素和山莴苣苦素，该方法分离量大，样品损失小、回收率高，分离环境缓和，节约溶剂。采用逆流色谱仪能直接进大量山莴苣素和山莴苣苦素粗品，分离结果达到较高的纯度，取得良好的分离效果。该方法不仅适用于从植物粗提取物中制备纯度较高的产品，同时也适用于对各种途径获得的山莴苣素和山莴苣苦素粗提物提纯。

主权项

一种山莴苣素和山莴苣苦素的制备方法，其特征在于采用高速逆流色谱法从毛菊苣根的粗提物或山莴苣素或山莴苣苦素粗品中得到山莴苣素和山莴苣苦素，具体操作按下列步骤进行：a、将毛菊苣根粉碎后，用浓度为70％‑100％甲醇或乙醇进行超声波辅助提取或浸泡或热回流提取，提取物减压浓缩后获得总浸膏；b、将总浸膏分散于水中，利用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇依次萃取，经减压蒸馏后分别得到石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位浸膏；c、将步骤b乙酸乙酯部位浸膏用乙酸乙酯溶解后，200‑300目硅胶柱层析分离，用正己烷‑乙酸乙酯溶剂剃度洗脱体积比4‑1∶1‑3，每份收集15‑20ml，将流份用薄层色谱法进行跟踪检查，以石油醚∶乙酸乙酯1∶5为展开剂，合并相同成分，减压浓缩，得到山窝苣素和山窝苣苦素粗品；d、配制五种组分的混合溶剂，将石油醚、正己烷、正庚烷或正戊烷和乙酸乙酯和甲醇或乙醇和水，分别按各组分体积比为：0‑2∶1‑20∶1‑2∶3‑20将四组分溶液分别放在分液漏斗，然后分别加入总体积15％‑25％四氢呋喃，摇匀后静置分层，待平衡后，分离上相和下相；e、再配制五种组分的混合溶剂，将石油醚、正己烷、正庚烷或正戊烷和乙酸乙酯和甲醇或乙醇和水，按各组分体积比为：0.5‑2∶2‑4∶2‑3∶3‑5将四组分溶液分别放在分液漏斗，然后分别加入总体积5％‑15％的四氢呋喃，摇匀后静置分层，待平衡后，分离上相和下相；f、将步骤b中的乙酸乙酯部位溶于步骤d所得的溶剂系统中，采用高速逆流色谱的方法进行分离，以上相为固定相，下相位流动相，先将固定相泵入分离柱，待分离柱充满后，调整转速至700‑900转/分，同时泵入流动相，流速为1.0‑2.0ml/min，待平衡后，由进样阀注入样品，打开自外检测器及记录仪，检测波长254nm，按色谱图收集所有馏分，按色谱图收集所有馏分，真空干燥后，经HPLC与标准样对照确定为山莴苣苦素，将剩余部分浓缩后溶于溶解于步骤e中再次进行高速逆流色谱分离，可获得山莴苣素；或步骤c中获得的山莴苣素和山莴苣苦素粗品，分别溶于步骤d和步骤e溶剂系统中进行分离，采用高速逆流色谱法，以上相为固定相，下相为流动相，先将固定相泵入分离柱，待分离柱充满后，调整转速至700‑900转/分，同时泵入流动相，流速为1.0‑2.0ml/min，待平衡后，由进样阀注入样品，打开自外检测器及记录仪，检测波长254nm，按色谱图收集所有馏分，真空干燥后，可获得纯度＞97％的山莴苣素和山莴苣苦素。