[发明专利]一种筛选抗辐射的核苷酸的方法

摘要

本发明涉及一种筛选核苷酸的方法，尤其是涉及一种筛选抗辐射的核苷酸的方法。本发明筛选最佳辐照防护作用的5′-核苷酸：选取淋巴液作为辐照对象，采用四唑盐(MTT)比色法，通过检测辐照组、未辐照组以及加入核苷酸样品组的活细胞数，确定4种核苷酸中辐照能力较强的5′-核苷酸。因此，本发明具有如下优点：具有良好辐射防护效果的合成及天然辐射防护剂，具有良好的抗辐射效果。因此，本发明具有如下优点：能对4种核苷酸的抗电离辐射作用进行初步筛选，选定抗电离辐射作用较好的5′-腺苷酸对辐射造成机体抗氧化指标的测定和评价进行分析。

主权项

1.一种筛选抗辐射的核苷酸的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1，用剪刀剔除结缔组织和脂肪并剪碎脾脏，将碎脾组织置于平皿内的不锈钢滤网上，所述不锈钢滤网大于等于200目，一手持网，另一手用注射器的针芯轻轻压挤脾组织，使单个核细胞经网入平皿内的PBS液中；吸取PBS液冲洗网；离心后低渗处理去除红细胞，再次离心洗涤，重悬细胞，制成1～5×10⁷个/ml单细胞悬液；以上操作过程中，细胞均置于0～4℃冰浴中，所述离心条件为：2000r/min×5min；步骤2，将1～5×10⁷个/ml单细胞悬液分布于96孔板中，建立细胞辐照模型：即X线辐照：在30KV、5mA的软X射线仪条件下照射100s～900s；步骤3，根据步骤2，设计实验分为未辐照组、辐照组、辐照+样品处理组：1～5×10⁷个/ml单细胞悬液接于96孔板，每孔加入180微升等体积的细胞悬液，辐照+样品处理组再加20微升等量不同浓度的核苷酸样品于细胞悬液中，未辐照组与辐照组则补加20微升等体积培养液，在37℃5％CO2培养箱中共孵育2h后，进行辐照，照后24h，采用四唑盐(MTT)比色法测定细胞致死情况，根据结果依次选择细胞存活率较高的核苷酸；核苷酸样品对细胞抗辐照致死作用按下列公式计算：