[发明专利]黄花苜蓿组培快速繁殖方法

摘要

本发明公开了一种黄花苜蓿组培快速繁殖方法，包括种子的处理、无菌苗的获得、愈伤诱导、增殖、分化、再生植株的获得及炼苗移栽等技术。本试验以黄花苜蓿无菌苗的子叶和下胚轴为外植体，接种到不同激素配比的愈伤组织诱导培养基中诱导愈伤形成，然后接种到分化培养基中分化成苗。将完整的分化苗进行炼苗，将炼好的苗从瓶中取出，洗净根部培养基后，将小苗移植到经消毒处理的基质中，覆上遮阴网，保湿保温，经10d后，去掉遮阴网，幼苗便可成活。本方法能得到较高的种子发芽率及组培苗分化率。

主权项

黄花苜蓿组培快速繁殖方法，包括种子的灭菌，无菌苗的产生，愈伤组织的诱导及分化，植株的再生，炼苗移栽，其特征是：一、种子的灭菌及无菌苗的获得：取黄花苜蓿种子在流水条件下冲洗20～30min，用浓度为70％的乙醇浸泡20～40s，浓度为0.1％HgCl2消毒4～12min，置于MS和1/2MS固体培养基中发芽，获得无菌苗；二、愈伤组织的诱导：取上述无菌苗的子叶和下胚轴，子叶切割成4mm×4mm、下胚轴切割成4mm，接入愈伤组织诱导培养基中，愈伤组织诱导培养基为MS+浓度为0.5～2mg/L 2，4‑D+浓度为0～1.5mg/L6‑BA+3％蔗糖+0.7％琼脂，pH值均调至5.89～5.92，经高温120℃高压灭菌20min，在19～25℃室内散射光条件下培养，即获得愈伤组织；三、分化培养及植株的再生：将上述愈伤组织转接到分化培养基上，分化培养基为MS+浓度为0.15～1.5mg/L KT+浓度为0.1～0.2mg/LNAA+0.7％琼脂，初次分化时加蔗糖3％、继代时加蔗糖2％，pH值均调至5.89～5.92，经高温120℃高压灭菌20min，在19～25℃室内散射光并开白炽灯条件下培养，培养约50d，即可再生出部分完整的分化苗；四、炼苗及移栽：炼苗移栽前，去掉封口膜，将完整的分化苗进行炼苗1～2d，将炼好的苗从瓶中取出，洗净根部培养基后，将小苗移植到经消毒处理的基质中，基质配比为壤土∶花卉土∶蛭石＝1∶1∶1，覆上遮阴网，保湿保温，经10d后，去掉遮阴网，幼苗便可成活。