[发明专利]从关节软骨中提取RNA的方法无效
| 申请号： | 201110225851.2 | 申请日： | 2011-08-08 |
| 公开（公告）号： | CN102250887A | 公开（公告）日： | 2011-11-23 |
| 发明（设计）人： | 刘军;王平;顾烽;顾大年;李则孝 | 申请（专利权）人： | 刘军;王平;顾烽 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 宜兴市天宇知识产权事务所(普通合伙) 32208 | 代理人： | 史建群 |
| 地址： | 214203 江苏省无锡市宜*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明是对从关节软骨中提取RNA方法的改进，其特征是将软骨组织在-20℃及以下冷冻用粉碎机粉碎成粉末状；在粉碎的软骨组织中加入复合变性液制成匀浆，离心收集上清液；加入聚乙二醇辛基苯基醚蛋白变性剂，使其浓度为0.25-0.35%V/V，冰浴冷却，用苯酚-氯仿-异戊醇混合溶剂多次抽提上清液；加入乙酸铵或乙酸钠至最终浓度为0.3M，然后用异丙醇或乙醇沉淀RNA；对沉淀物用RNA纯化药盒进一步纯化。本发明方法从关节软骨中获得的RNA，得率高，纯度高，数量和质量都足以进行软骨细胞基因表达研究，得率较常规方法提高5－8倍，RNA260μm紫外吸收值/280μm紫外吸收值比值≥2，具有很高纯度，并RNA原有特性没有发生任何改变，解决了现有技术从软骨细胞中提取RNA得率低和纯度低的两大问题。 | ||
| 搜索关键词： | 关节 软骨 提取 rna 方法 | ||
【主权项】：
从关节软骨中提取RNA的方法，其特征在于将软骨组织在‑20℃及以下冷冻用粉碎机粉碎成粉末状；在粉碎的软骨组织中加入复合变性液制成匀浆，离心收集上清液；加入聚乙二醇辛基苯基醚蛋白变性剂，使其浓度为0.25‑0.35% V/V，冰浴冷却，用苯酚‑氯仿‑异戊醇混合溶剂多次抽提上清液；加入乙酸铵或乙酸钠，然后用异丙醇或乙醇沉淀RNA；对沉淀物用RNA纯化药盒进一步纯化。
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