[发明专利]重组抗菌肽buforin IIb的生产方法有效
| 申请号： | 201110231011.7 | 申请日： | 2011-08-12 |
| 公开（公告）号： | CN102925432A | 公开（公告）日： | 2013-02-13 |
| 发明（设计）人： | 殷志敏;王期;周军 | 申请（专利权）人： | 南京巴傲得生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/11 | 分类号： | C12N15/11;C12N15/70;C07K14/00;C07K1/22 |
| 代理公司： | 南京苏高专利商标事务所(普通合伙) 32204 | 代理人： | 肖明芳 |
| 地址： | 210000 江苏省南京市*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开了重组抗菌肽buforin IIb的生产方法，应用重组DNA技术，构建pSUMO/buforin IIb原核表达载体，再转化大肠杆菌，构建表达工程菌；工程菌以乳糖为诱导剂诱导表达SUMO-buforin IIb融合蛋白；然后经细胞破碎后释放出融合蛋白，使用镍离子亲和层析纯化，纯化后的融合蛋白经SUMO酶切反应，释放出buforin IIb，经镍离子亲和层析分离得到含有His6标签的SUMO蛋白和不含His6的buforin IIb蛋白。本发明方法在原核宿主细胞中高效表达了重组抗菌肽buforin IIb，分离纯化简单，重组蛋白纯度高，易操作，易放大，表达产物稳定性好，适于大规模工业化生产。 | ||
| 搜索关键词： | 重组 抗菌 buforin iib 生产 方法 | ||
【主权项】：
重组抗菌肽buforin IIb的生产方法，其特征在于，它包括如下步骤：(1)应用重组DNA技术，将buforin IIb基因插入pSUMO载体中，构建pSUMO/buforin IIb原核表达载体；(2)pSUMO/buforin IIb原核表达载体转化大肠杆菌，构建表达工程菌；(3)将步骤(2)得到的工程菌以乳糖为诱导剂诱导表达SUMO‑buforin IIb融合蛋白；(4)收集步骤(3)诱导表达后的菌体，经细胞破碎后释放出SUMO‑buforin IIb融合蛋白，使用镍离子亲和层析纯化，得到纯化后的SUMO‑buforin IIb融合蛋白；(5)将纯化后的SUMO‑buforin IIb融合蛋白经酶切反应，释放出buforin IIb，经镍离子亲和层析分离得到含有His6标签的SUMO蛋白和不含His6的buforin IIb蛋白。
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