[发明专利]一种结核分枝杆菌重组包涵体蛋白的复性与纯化方法

摘要

本发明涉及生物制药技术领域，特别涉及一种结核分枝杆菌重组包涵体蛋白的复性与纯化方法，包括有制备初步纯化的rTPA38KDa包涵体蛋白，rTPA38KDa包涵体蛋白的裂解，第一次阴离子交换层析方法进行复性和纯化，第二次阴离子交换层析方法进一步纯化，超滤后获得rTPA38KDa包涵体蛋白原液。本发明采用“先复性后纯化”的方法，通过两次阴离子交换层析完成目的蛋白的复性和纯化，目的蛋白总得率达到30%以上，纯度达到95%以上,与现有技术相比，本发明采用的方法可工业放大，便于质量控制，其工艺步骤少、生产成本更低、效率更高。

主权项

一种结核分枝杆菌重组包涵体蛋白的复性与纯化方法，其特征在于：所述方法包括有以下步骤：步骤a.制备初步纯化的rTPA38KDa 包涵体蛋白将发酵培养的初始工程菌经破碎、收集沉淀、洗涤、离心后获得初步纯化的rTPA38KDa 包涵体蛋白；步骤b.rTPA38KDa 包涵体蛋白的裂解将步骤a获得的rTPA38KDa 包涵体蛋白采用变性剂溶液溶解，过滤后获得含有裂解的rTPA38KDa 包涵体蛋白的变性液；步骤c.第一次阴离子交换层析方法进行复性和纯化将步骤b获得的变性液采用含有DEAE‑Sepharose FF层析介质的阴离子交换层析方法进行复性和纯化，收集洗脱峰，获得含有已复性和中度纯化的rTPA38KDa 包涵体蛋白的第一缓冲液；步骤d.第二次阴离子交换层析方法进一步纯化将步骤c获得的第一缓冲液采用含PEI‑WP 硅胶层析介质的阴离子交换层析方法进一步纯化，收集洗脱峰，获得含有高度纯化的rTPA38KDa 包涵体蛋白的第二缓冲液；步骤e：将步骤d获得的第二缓冲液进行超滤或透析获得rTPA38KDa 包涵体蛋白原液。