[发明专利]一种通过悬浮培养提高鞑靼荞麦不定芽分化率的方法

摘要

本发明公开了一种通过悬浮培养提高鞑靼荞麦不定芽分化率的方法，该方法在离体条件下建立了鞑靼荞麦的固体-液体-固体培养体系，诱导愈伤组织频率为100％，不定芽分化率为90.7％，生根率为100％。在人工调控下，8-10周可获得再生植株。本发明方法简单易行，效率高，可以减轻鞑靼荞麦愈伤组织褐化程度，促进不定芽的分化，缩短培养时间，为提高鞑靼荞麦的离体高频再生体系建立重要的技术基础。

主权项

一种通过悬浮培养提高鞑靼荞麦不定芽分化率的方法，其特征在于，按以下步骤进行：(1)外植体的获得将成熟的鞑靼荞麦种子在水中浸泡10分钟后去皮，将剥好皮的种子在质量分数为70％的酒精中表面消毒1min，再在0.1％的升汞中灭菌15min，最后用无菌水漂洗四次；将灭菌后的种子接种到不含蔗糖的1/2MS固体培养基上，在温度为25℃±2℃和光强为2000lx条件下萌发；(2)愈伤组织的诱导将萌发7天龄的苦荞无菌苗下胚轴剪为0.5cm长的小段，接种在诱导愈伤组织培养基上，在温度为25℃±2℃、光照培养条件为500‑2000Lx的条件下培养15天；所述的诱导愈伤组织培养基的组成为：在常规的MS培养基中加入质量浓度为0.8％的琼脂，质量浓度为3％的蔗糖，1‑2mg/L的2，4‑D，0.1‑1mg/L的6‑BA，10mg/L的AgNO3；(3)不定芽的诱导将诱导的愈伤组织转移到液体MS分化培养液上，250ml三角瓶含有60ml液体MS分化培养液，20rpm，在温度为25℃±2℃、光照强度为1000‑2500Lx条件下，每天光照16h，进行诱导苗的分化；所述的液体MS分化培养液的组成为：在液体MS培养基中加入0.5‑2mg/L的NAA，1‑2mg/L的6‑BA，0.1‑1mg/L的TDZ，5mg/L的AgNO3，0.1‑0.3mg/L的水解酪蛋白，接种密度为40g/L，待2‑3周愈伤组织出现芽点后，将带有芽点的愈伤组织从液体MS分化培养基中取出，转入固体MS分化培养基中继续培养，其中，MS固体分化培养基成分与MS液体分化培养基成分相同，琼脂质量浓度为0.8％；(4)苗的生根待不定芽长至2‑3cm，将诱导得到的不定芽剪下，插入诱导生根培养基中进行培养，所述的诱导生根培养基的组成为：在常规的MS固体培养基中加入1mg/L的NAA，琼脂0.8％，培养温度为25℃±2℃、光强为2000lx、每天光照16h，培养2‑3周后即可获得大量组培苗。