[发明专利]一种用低温乙醇法从组份Ⅳ沉淀中回收白蛋白的方法

摘要

本发明涉及一种用低温乙醇法从组份Ⅳ沉淀中提起回收白蛋白的方法。现有技术回收率不高。本发明采用的技术方案至少包含以下步骤：（1）Ⅳ沉淀热处理，（2）FⅢ沉淀的制备，（3）FⅢ上清液的制备，（4）Ⅴ沉淀的制备（5）除杂（6）白蛋白制品的制备。本发明有效提高了白蛋白的总收得率，降低了生产成本，提高了企业利润；在分离过程中按各组份分步沉淀，并采用离子交换层析进行纯化，生产工艺更加精细，提高了制品的质量。

主权项

一种用低温乙醇法从组份Ⅳ沉淀回收白蛋白的方法，其特征在于：至少包含以下步骤：（1）Ⅳ沉淀热处理从冷库中取出组份Ⅳ沉淀，称重后置于洁净的不锈钢反应罐中，向反应罐中注入4～6倍体积的5℃以下的注射用水溶解沉淀，控制溶液温度在0～5℃搅拌待其完全溶解后，加入磷酸二氢钠至0.01mol/L，然后用氢氧化钠调节pH值至6.9±0.1，搅拌5～6小时，加入辛酸钠至0.025mol/L，继续搅拌至少2小时，之后将溶液加温至68.0±0.5℃，保温1～1.5小时后迅速降温至0～15℃；（2）FⅢ沉淀的制备将加温后的制品打入反应罐，用0.2 mol/L的盐酸调节pH值至4.5±0.05，缓慢加入95%（v/v）的乙醇，令反应液中乙醇体积浓度升至5～8%，将制品加压过滤，得FⅢ沉淀和滤液，将滤液用注射用水超滤去除有机溶剂并浓缩至蛋白浓度≥18%；      （3）FⅢ上清液的制备        所得FⅢ沉淀用800～1000升温度在5℃以下的注射用水溶解，搅拌令其完全溶解后加入氯化钠至8～9g/L和枸橼酸钠2～3g/L，将溶解液与上述滤液混合，添加氯化钠至7±0.5g/L，枸橼酸钠4±0.5g/L；用氢氧化钠调节pH5.25±0.05，缓慢添加体积分数为95%的乙醇至体积浓度20%，同时降温至‑4.5±0.5℃，压滤去除FⅢ沉淀，得FⅢ上清液；（5）Ⅴ沉淀的制备用0.2 mol/L的氢氧化钠调节FⅢ上清至pH6.3±0.1，保持温度在‑4.5±0.5℃，缓慢添加乙醇至乙醇体积浓度38%；压滤后得FⅢ‑1上清滤液，调节pH为5.75±0.05，降温至‑5.5±0.5℃，并添加乙醇至浓度40%；将FⅢ‑1上清滤液压滤后得FⅢ‑2上清滤液，调节pH至4.80±0.05，继续降温至‑8.0±0.1℃，压滤后获得组份Ⅴ沉淀；（6）除杂将组份Ⅴ沉淀用6～7倍体积的注射用水溶解，调pH至4.6±0.1，保持温度在‑3～‑2℃，缓慢添加乙醇至乙醇体积浓度12～14%，将溶液经深层过滤去除杂质，再调节滤过液pH值至5.20±0.05，经离子交换层析去除溶液中的杂蛋白，流出液用1mol/L的碳酸氢钠调节pH7.1±0.1，添加氯化钠至9±0.1g/L；（8）白蛋白制品的制备将蛋白质溶液进行超滤至蛋白质浓度≥18%，获得白蛋白制品溶液，经病毒灭活和除菌分装后获得白蛋白制品。