[发明专利]一种牛囊胚内细胞团细胞和滋养层细胞的差异染色方法有效
| 申请号： | 201110251106.5 | 申请日： | 2011-08-29 |
| 公开（公告）号： | CN102426126A | 公开（公告）日： | 2012-04-25 |
| 发明（设计）人： | 苏建民;张涌;刘军 | 申请（专利权）人： | 西北农林科技大学 |
| 主分类号： | G01N1/30 | 分类号： | G01N1/30 |
| 代理公司： | 西安通大专利代理有限责任公司 61200 | 代理人： | 陆万寿 |
| 地址： | 712100 *** | 国省代码： | 陕西;61 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种牛囊胚内细胞团细胞和滋养层细胞的差异染色方法，包括以下步骤：1)利用免疫染色方法，以抗CDX2单克隆抗体作为一抗，将其与特异表达在牛囊胚滋养层细胞的CDX2分子进行免疫结合；2)利用免疫染色方法，以红色荧光标记的能够与抗CDX2单克隆抗体结合的抗体作为二抗，对清洗后的结合有一抗的牛囊胚进行免疫染色；3)在免疫染色完成后，对牛囊胚进行整体的细胞核荧光染色，以形成差异染色。本发明在CDX2蛋白在滋养层细胞内特异性表达，而在内细胞团细胞上不表达的基础上，这样利用基于CDX2分子的红色免疫染色和DAPI细胞核蓝色染色来进行差异染色，准确率为100％，而且图片清晰漂亮。 | ||
| 搜索关键词： | 种牛 囊胚 细胞 滋养 差异 染色 方法 | ||
【主权项】：
一种牛囊胚内细胞团细胞和滋养层细胞的差异染色方法，其特征在于，包括以下步骤：1)利用免疫染色方法，以抗CDX2单克隆抗体作为一抗，将其与特异表达在牛囊胚滋养层细胞的CDX2分子进行免疫结合：将牛囊胚在含一抗的免疫染色液中，于4℃孵育10～16h，然后进行清洗；2)利用免疫染色方法，以红色荧光标记的能够与抗CDX2单克隆抗体结合的抗体作为二抗，对清洗后的结合有一抗的牛囊胚进行免疫染色：在避光条件下，将牛囊胚在含二抗的免疫染色液中，于室温避光孵育2h，然后进行清洗；3)在免疫染色完成后，对牛囊胚进行整体的细胞核荧光染色，以形成差异染色：将牛囊胚在细胞核荧光染色液中，于室温避光孵育3～5min，然后进行清洗；4)将牛囊胚放在载玻片上，用盖玻片压好，然后用荧光显微镜照相。
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