[发明专利]一种对重金属铜高度敏感的生物传感器的制备方法及其产品有效
| 申请号： | 201110259158.7 | 申请日： | 2011-08-25 |
| 公开（公告）号： | CN102417901A | 公开（公告）日： | 2012-04-18 |
| 发明（设计）人： | 谭国强;李东;王娟娟;赵建国;洪旭芬 | 申请（专利权）人： | 温州医学院 |
| 主分类号： | C12N15/09 | 分类号： | C12N15/09;C12N15/63;C12N15/62;C12N1/21 |
| 代理公司： | 温州瓯越专利代理有限公司 33211 | 代理人： | 傅敏华 |
| 地址： | 325000 浙江省*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明涉及大肠杆菌生物传感器制备方法及其产品，制备方法的技术方案是：(1)利用Red重组系统，敲除野生型大肠杆菌E.coli MC4100基因组中copA、cueO和cusA三个基因；(2)利用交叉PCR技术构建融合报告基因PcopA::gfpmut2；(3)将步骤2所得片段克隆到pMD18-T载体上；(4)将载体PcopA::gfpmut2-T经双酶切切下目的条带连接到pET28a载体上；(5)将步骤4所得融合报告载体转化至步骤1的ΔcopA-ΔcueO-ΔcusA三基因突变菌株。上述方案得到产品是由野生型大肠杆菌E.coli MC4100缺失copA、cueO和cusA三个基因，并转化入融合报告载体PcopA::gfpmut2-pET28a，本发明产品具有特异、敏感、快速、简便、高效和高性价比等特点，适用于铜离子的野外实时实地监测。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 重金属 高度 敏感 生物 传感器 制备 方法 及其 产品 | ||
【主权项】：
一种对重金属铜离子高敏感的大肠杆菌生物传感器的制备方法，其特征在于：包含以下步骤：(1)利用条件复制质粒pKD46和pCP20，利用Red重组系统，敲除野生型大肠杆菌E.coli MC4100基因组中copA、cueO和cusA三个基因，构建ΔcopA‑ΔcueO‑ΔcusA三基因突变菌株；(2)利用交叉PCR技术构建含有报告基因gfpmut2与大肠杆菌copA基因启动子PcopA及转录终止子SoxS相融合的融合报告基因PcopA::gfpmut2；(3)将步骤2所得片段克隆到pMD18‑T载体上，构建PcopA::gfpmut2‑T重组载体；(4)测序分析正确的重组载体PcopA::gfpmut2‑T经双酶切切下目的条带连接到pET28a载体上，构建融合报告载体PcopA::gfpmut2‑pET28a；(5)将步骤(4)所得融合报告载体转入步骤1构建的ΔcopA‑ΔcueO‑ΔcusA三基因突变菌株。
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