[发明专利]一种用醋酸纤维素/聚丙烯复合膜固定化磷脂酶的方法

摘要

本发明提供一种以醋酸纤维素和聚丙烯膜为材料制备了醋酸纤维素/聚丙烯复合膜，采用吸附-交联相结合的固定化方法，用该复合膜来固定化磷脂酶。研究了吸附时间、酶液浓度、交联剂浓度、交联时间和交联温度等不同固定化条件对磷脂酶固定化效率和催化效果的影响，并对固定化酶膜的酶学性质进行了讨论。通过固定化酶膜的SEM图像进一步解释利用醋酸纤维素/聚丙烯复合膜固定化磷脂酶的优势。根据本发明中复合膜的吸附特性固定化磷脂酶，提高了酶在反应体系中的活性和稳定性，调节和控制酶的活性与选择性，从而有利于酶的回收和产品的生产，最终得到的固定化酶活为4.6U/cm2。

主权项

一种用醋酸纤维素/聚丙烯复合膜固定化磷脂酶的方法，其特征在于用复合膜来固定化磷脂酶的方法通过以下步骤实现：一、复合膜的制备：将5g醋酸纤维素溶于100mL丙酮中，待溶解完全成均一的膜液后，取实验前制备好的聚丙烯膜浸于溶有醋酸纤维素的丙酮溶液中，自然成膜，以去离子水冲洗醋酸纤维素/聚丙烯复合膜数次干燥备用；二、磷脂酶的固定化：取若干份1cm2的醋酸纤维素/聚丙烯复合膜于三角瓶中，分别加入一定量的酶液和pH＝5.0的磷酸氢二钠/柠檬酸缓冲液，恒温搅拌吸附一定时间(25℃，160r/min)。再加入一定量戊二醛进行交联反应，反应结束后取出酶膜，用去离子水冲洗，放于干燥处待其风干后测定酶活。三、酶活力的测定：一定量的底物无油磷脂溶于预定pH值的缓冲液中，经磁力搅拌器充分搅拌，混合均匀。取4个100mL三角瓶，2个作为空白瓶，2个作为样品瓶，各加底物溶液25mL，再于空白瓶中加入95％乙醇15mL，于预定温度的水浴中预热5min，然后在各瓶中加入1cm2的固定化酶膜，立即混匀计时，在预定温度的水浴中180r/min的条件振荡准确反应15min，然后于样品瓶中立即补加95％乙醇15mL终止反应，取出，用微量滴定管和配置好的NaOH标准溶液滴定，计算标准碱液平均消耗量。四、固定化条件的优化：吸附时间0.5～5.5h，酶液浓度0.02～0.07g/mL，戊二醛浓度0.1～0.6％，交联时间2～7h，交联温度1～11℃的条件下，通过测定固定化酶活力得到最佳的固定化条件。五、固定化酶酶学性质的讨论：在温度40～70℃，pH4.5～7范围内，通过测定固定化酶和游离酶的活力，得出固定化酶的最适温度，最适pH值。并通过重复测定酶活来讨论固定化酶的使用稳定性。六、通过固定化酶膜的SEM图像进一步解释利用醋酸纤维素/聚丙烯复合膜固定化磷脂酶的优势。