[发明专利]固定化全细胞催化剂合成非天然氨基酸的方法无效
| 申请号： | 201110277030.3 | 申请日： | 2011-09-19 |
| 公开（公告）号： | CN102352387A | 公开（公告）日： | 2012-02-15 |
| 发明（设计）人： | 王波;梁晓亮;王玉全;曾聪明;孙勇;张淑蓉;文军 | 申请（专利权）人： | 尚科生物医药（上海）有限公司 |
| 主分类号： | C12P13/04 | 分类号： | C12P13/04;C12N11/10;C12N11/08;C12N15/53;C12N15/63;C12N1/21;C12R1/19 |
| 代理公司： | 上海硕力知识产权代理事务所 31251 | 代理人： | 王法男 |
| 地址： | 201319 上海市浦*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明涉及制药和生物技术领域，利用包含亮氨酸脱氢酶及能使辅因子再生的甲酸脱氢酶的全细胞催化剂还原α-酮酸制备非天然氨基酸；尤其是以三甲基丙酮酸为底物酶法合成L-叔亮氨酸，将亮氨酸脱氢酶和甲酸脱氢酶克隆到重组大肠杆菌中共表达，并将细胞固定化；利用固定化全细胞催化，不用加入“外来”辅因子而对底物进行转化。且固定化全细胞催化具有成本低，操作方便的优点，本方法属于生物合成法，反应条件温和，作用专一，无副产物，在医药及食品等行业中均有应用价值。 | ||
| 搜索关键词： | 固定 细胞 催化剂 合成 天然 氨基酸 方法 | ||
【主权项】：
固定化全细胞催化剂合成非天然氨基酸的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将固定化全细胞催化剂、α‑酮酸盐、甲酸铵及磷酸缓冲液混合，在pH6.0～9.0、25～40℃条件下反应5～20小时；反应混合液中固定化全细胞催化剂湿重浓度为10～200g/L，α‑酮酸盐浓度为100～1000mmol/L，甲酸铵浓度为500～1500mmol/L；所述的固定化全细胞催化剂中含有重组细胞，重组细胞中含有甲酸脱氢酶基因和亮氨酸脱氢酶基因；(2)回收固定化全细胞催化剂，反应液降温至5～15℃，ph调节至13～14；5～15℃下，滴加氯甲酸甲酯，搅拌反应8～16小时；ph调节至1.5～3，5～15℃下，萃取洗涤干燥。
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