[发明专利]一种可德胶及其制备方法

摘要

本发明是一种可德胶及其制备方法。可德胶取保藏号为CGMCC5103的Agrobacteriumsp.fcyn1经菌种活化、一级种子培养、二级种子培养、菌体培养、发酵培养、一次离心、二次离心、三次离心等步骤，干燥并收获可德胶。本发明利用Agrobacteriumsp.fcyn1菌株生产可德胶，产量达到34.5g/L，比现有技术提高了97.3%，且发酵周期短，遗传性能稳定，节约成本，价格低廉。

主权项

一种可德胶的制备方法，其特征在于按以下步骤进行：1）菌种活化：取保藏号为CGMCC 5103的Agrobacterium sp. fcyn1菌种，在含1.5%琼脂糖的LB平板上划线获得单菌落；2）一级种子培养：取形态和长势较好的单菌落接种于含LB培养基中，30℃，200RPM，振荡培养48～50 h，获得一级种子菌；3）二级种子培养：将一级种子菌50倍稀释在二级种子培养基中，30℃、 200 RPM 培养48～50 h培养，培养基组成g/L：蔗糖20，酵母膏10，KH2PO4 1.74，MgSO4·7H2O 0.49，pH 7； 4）菌体培养：将二级种子菌体转入菌体培养基中培养，培养基组成g/L：蔗糖糖 15，酵母膏 2.0，NH4Cl 0.5，KH2PO4  0.5，MgSO4·7H2O 0.5，并含0.3%v/v无机盐浓缩液，pH 7.00；以600 RPM，10～20%的溶氧量，用10～20％氨水和3M H2SO4调节pH值至6.8～7.2培养24h后，加入10% v/v 400g/L蔗糖后，在相同条件再培养24～26 h；5）发酵培养：蔗糖50～55，大豆粉3.0，KH2PO4 0.4～0.5，MgSO4·7H2O 0.5~0.6，柠檬酸钾0.3～0.4和无机盐浓缩液0.3% v/v，pH 5.5～6.0，以600 RPM，空气流量为1.5～2.0 v/vm，并用4 M NaOH和3 M H2SO4发酵培养36～38 h，加入10% （v/v）500 g/L蔗糖后，在相同条件培养36～38 h，此时再次加入10%（v/v）500 g/L蔗糖，再在相同条件培养36～38 h后获得发酵液；6）一次离心：发酵培养液以4000 g，离心30 min，弃上清溶液，收聚含可德胶和菌体的沉淀部分；7）可德胶的碱溶解：在含可德胶和菌体的沉淀中加入50 mM的氢氧化钠搅拌重悬沉淀，并放置1 h，溶解并提取可德胶；8）二次离心：提取液，以4000 g，离心30 min，弃含菌体的沉淀部分，回收含可德胶的上清溶液；9）酸沉淀：上清液用4 M硫酸调pH值到5，混匀后放置１h；10）三次离心：浑浊液4000 g，离心30 min，弃上清液，收集可德胶沉淀物；11）干燥并收获可德胶：80～85 ℃烘干后获得发酵的可德胶。