[发明专利]一种赤藓红色素的人工抗原的制备方法

摘要

一种赤藓红色素的人工抗原的制备方法，属于生物化工技术领域。本发明以赤藓红衍生物ETS为半抗原，用活性酯法将其与载体蛋白牛血清白蛋白BSA偶联，即得赤藓红的人工抗原：赤藓红衍生物ETS-牛血清白蛋白；用紫外扫描仪测定偶联物的偶联比。本发明成功合成了赤藓红衍生物ETS的人工抗原，合成步骤简洁，有效，完全可用于免疫分析当中，为以后人们的研究提供了必需的人工抗原，可以满足国内对其研究的需要。

主权项

一种赤藓红衍生物ETS人工抗原的合成方法，其特征在于以赤藓红衍生物ETS为半抗原，用活性酯法将其与载体蛋白BSA偶联，用紫外扫描仪测定偶联物的偶联比；（1）半抗原的合成：制备赤藓红衍生物ETS：取0.1mmol赤藓红和0.11mmol的盐酸在水溶液中避光反应6h，离心取沉淀并用N,N‑二甲基甲酰胺DMF稀释，然后加入0.5mL的含有0.1mmol六氨基己酸的水溶液以及0.15mmol碳化二亚胺EDC和0.15mmol N‑羟基硫代琥珀酰亚胺Sulf‑NHS避光反应24h，离心取上清得到赤藓红衍生物ETS；（2）赤藓红衍生物ETS人工抗原的合成：取0.5mL含有0.02398mmol赤藓红衍生物ETS的N,N‑二甲基甲酰胺DMF溶液到棕色小瓶中，再加入0.06807 mmol的N‑羟基硫代琥珀酰亚胺Sulf‑NHS和0.09033 mmol碳化二亚胺EDC，室温反应8h，为A液；将0.0005mmol牛血清白蛋白BSA溶解到0.01M、pH7.4的磷酸盐缓冲液中，为B液；然后将A液缓慢滴加到B液中，室温反应6h，离心去掉沉淀，取上清液即得人工抗原混合液；透析袋前处理：取10cm的透析袋，于沸水中煮沸5min，再用60℃的去离子水冲洗3min，保存在4℃去离子水中备用；将人工抗原混合液移入透析袋中，用2L的pH 7.4、0.01M的磷酸盐缓冲溶液透析2次，再用2L的去离子水透析2次，共透析3天；最后使用冻干法将透析袋中的液体制成粉末，即得到人工抗原：赤藓红衍生物ETS‑牛血清白蛋白；（2）赤藓红衍生物人工抗原的鉴定：赤藓红衍生物ETS‑牛血清白蛋白采用紫外扫描仪测定其偶联比。