[发明专利]一种c-di-GMP的分离纯化方法无效

专利信息
申请号: 201110279973.X 申请日: 2011-09-20
公开(公告)号: CN102443031A 公开(公告)日: 2012-05-09
发明(设计)人: 谷立川;朱春原;许素娟;陈颖;李冰清 申请(专利权)人: 山东大学
主分类号: C07H19/213 分类号: C07H19/213;C07H1/06
代理公司: 济南圣达知识产权代理有限公司 37221 代理人: 李健康
地址: 250100 山*** 国省代码: 山东;37
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摘要: 发明公开了一种c-di-GMP的分离纯化方法,是将c-di-GMP粗产物溶液直接上样于配有离子交换色谱柱的快速蛋白液相色谱,用pH8.0缓冲液梯度洗脱,紫外检测器254nm检测,收集出峰位置处洗脱液,用质谱确证结构,然后将含目标化合物洗脱液冻干,即制得固体c-di-GMP。本发明方法制得的c-di-GMP经反相高效液相色谱检测其纯度达95%以上,并实现了一步法直接从c-di-GMP粗产物溶液中分离纯化c-di-GMP,且本发明工艺简单,周期短,不使用毒性有机溶剂,是一种高效、环保、适合工业化生产的新方法。
搜索关键词: 一种 di gmp 分离 纯化 方法
【主权项】:
一种c‑di‑GMP的分离纯化方法,步骤是:(1)取含c‑di‑GMP的粗产物溶液,以1~5mL/min的流速,直接上样于配有离子交换色谱柱的快速蛋白液相色谱,上样量为1~1000mL;(2)上样结束后,用洗脱液A和洗脱液B梯度洗脱,流速为1~5mL/min;其中所述洗脱液A为pH8.0的缓冲液,所述缓冲液为Tris‑HCl、Na2HPO4‑NaH2PO4或K2HPO4‑KH2PO4;所述洗脱液B为A液中加入1MNaCl;(3)用紫外检测器在254nm下检测,收集出峰位置处洗脱液,用质谱确证结构,然后将含目标化合物洗脱液冻干,制得固体c‑di‑GMP;(4)以反相高效液相色谱检测,确定固体c‑di‑GMP纯度。
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