[发明专利]一种脂肽类生物表面活性剂的工业化生产方法

摘要

本发明涉及一种鼠糖脂生物表面活性剂干粉的工业化生产方法。该方法包括下列步骤：(1)菌种选育；(2)斜面种子培养；(3)菌种扩大培养；(4)工业发酵培养；(5)生产出的脂肽类生物表面活性剂发酵液经高速离心机在8000rpm/min的转速下离心，分别得到脂肽分离液及枯草芽孢杆菌。由本方法生产的脂肽表面活性剂发酵液原液表面张力＜26mN/m，经离心去除菌体后再稀释500倍表面张力＜34mN/m。经分离得到的脂肽分离液可用于三元复合驱采油中，其驱油效果在水驱基础上可提高8-16％。经分离得到的枯草芽孢杆菌经检测每6ml发酵液中的菌数可达到100亿个以上，可用于生产加工EM菌液，应用于农业、畜牧养殖、污水处理(工业污水及养殖污水)等领域。

主权项

一种鼠糖脂生物表面活性剂干粉的工业化生产方法，该方法包括以下步骤：(1)菌种选育：出发菌选取中国工业微生物菌种保藏管理中心编号为10366的枯草芽孢杆菌，经过富集培养，血平板分离筛选，获得一株高产的生产菌，编号为VTS‑1106；(2)斜面种子培养：培养基的配比为葡萄糖15‑25g/L，硝酸铵3‑8g/L，磷酸二氢钾0.8‑1.2g/L，磷酸氢二钠1‑2g/L，硫酸镁0.2‑0.8g/L，酵母粉0.5‑1g/L，L‑谷氨酸0.5‑1g/L，烟酸0.0002g/L，余量为水；pH值7.2‑7.3，0.1Mpa灭菌20min，斜面培养在37℃恒温培养24h，检查无染菌备用；(3)菌种扩大培养：向种子罐中加入培养基，将种子罐用蒸气高温灭菌，温度121℃，压力0.05Mpa，灭菌20min；将培养好的斜面菌种接至种子罐进行扩大培养，培养温度37℃，培养18h‑24h，检测细菌数达到1010‑1012即可供发酵使用；培养基的配比为：培养基的配比为：葡萄糖1.5‑2g/100ml，硝酸铵0.4‑0.6g/100ml，氯化钙0.007‑0.009g/100ml，磷酸二氢钾0.15‑0.2g/100ml磷酸氢二钠0.8‑0.85g/100ml，硫酸镁0.02‑0.025g/100ml，酵母粉0.06‑0.1g/100ml，余量为水；(4)工业发酵培养：制备培养基：称取培养基加入发酵罐中，搅拌溶解并调整PH值为6.0；培养基配比：葡萄糖15‑25g/L，硝酸铵3‑8g/L，磷酸二氢钾0.8‑1.2g/L，磷酸氢二钠1‑2g/L，硫酸镁0.2‑0.8g/L，酵母粉0.5‑1g/L，L‑谷氨酸0.5‑1g/L，烟酸0.0002g/L，余量为水；灭菌：采用蒸气高温灭菌，升温至121℃灭菌20min，灭菌完成后冷却，做无菌检查；接种：经检测无菌后向发酵罐内接种，接种量为2％；培养：接种完毕后，开始培养；将温度控制在37±2℃，通风比1∶0.6‑1.0，转速130rpm/min，罐压0.05mpa，pH值6.5‑7.0；流加：待发酵过程中糖的消耗量降至1％左右时，向发酵罐内流加50wt的蔗糖水溶液，流加量为发酵培养基中葡萄糖总添加量的20wt％；放罐：待检测发酵液中的残糖量降至0.2％左右时，发酵结束，整体发酵时间控制在48‑60h；(5)生产出的脂肽类生物表面活性剂发酵液经高速离心机在8000rpm/min的转速下离心，分别得到脂肽分离液及枯草芽孢杆菌。