[发明专利]克伦特罗单克隆抗体的制备及其应用

摘要

本发明提供了一种克伦特罗单克隆抗体及其应用。本发明公开了一种克伦特罗单克隆抗体的制备方法，通过合成克伦特罗半抗原以及克伦特罗半抗原与载体蛋白免疫得到克伦特罗抗原，将其免疫动物得到高特异性单克隆抗体。本发明还提供的一种将克伦特罗单克隆抗体应用于克伦特罗酶联免疫试剂盒检测克伦特罗的方法。本发明还提供了一种将克伦特罗单克隆抗体应用于克伦特罗胶体金试纸卡检测检测克伦特罗的方法。本发明制备得到的克伦特罗单克隆抗体特异性高，成本低，以此克伦特罗单克隆抗体制备的克伦特罗酶联免疫试剂盒和胶体金试纸卡检测克伦特罗药物具有操作方便、检测成本低、特异性高、灵敏度高、准确度高、精确度高、检测快速等特点。

主权项

一种克伦特罗单克隆抗体的制备方法，其特征在于所述克伦特罗单克隆抗体采用合成的克伦特罗半抗原与载体蛋白偶联得到的抗原进行动物免疫而得到的，克伦特罗半抗原的合成方法包括下述步骤：(1)1.0‑10.0g盐酸克伦特罗加入到20‑100ml二甲基甲酰胺(DMF)中，加入5‑25ml三乙胺，10‑20％摩尔当量的4‑二甲氨基吡啶(DMAP)，0℃下滴加1.1‑1.5摩尔当量的叔丁基二甲基氯硅烷在10‑50ml DMF中的溶液，滴加完毕后，室温继续反应1‑10小时，蒸除大部分溶剂，加水，乙酸乙酯萃取，水洗，干燥，除去溶剂后在环己烷‑乙酸乙酯中重结晶得到白色固体，为O‑硅烷化克伦特罗；(2)1.0‑5.0g步骤(1)所得产物，加入20‑50ml DMF溶解，加入0.5‑1.5g NaOH，搅拌下滴加1.1‑1.5摩尔当量的溴丁酸乙酯在10‑20ml DMF中的溶液，室温至60℃反应10‑20小时。乙酸乙酯萃取，水洗，干燥，除去溶剂后在环己烷‑乙酸乙酯中重结晶得到白色固体，为O‑硅烷化‑N‑烷基化克伦特罗；(3)1.0‑3.0g步骤(2)中产物，溶入50‑100ml四氢呋喃(THF)中，加入1.5‑2.0摩尔当量的氟化四丁基胺(TBAF)，室温反应10‑20小时，蒸除溶剂，乙酸乙酯溶解，水洗，干燥，除去溶剂后在环己烷‑乙酸乙酯中重结晶得到白色固体；(4)0.87‑1.74g步骤(3)产物，融入50‑100ml 1∶1乙醇/水溶液中，加入0.38‑0.76g硼氢化钠，室温反应5‑10小时后，除去溶剂，异丙醇中重结晶得到粘稠状物质或者白色无定形固体，为克伦特罗半抗原。