[发明专利]基因突变和HIV-1耐药突变位点检测方法及试剂盒

摘要

本发明涉及一种HIV-1耐药突变位点基因检测方法、试剂盒和应用，公开了用于基因突变特别是HIV-1耐药突变位点基因检测的核苷酸引物、探针序列及方法，以及该方法在临床上检测HIV-1耐药突变位点中的应用。本发明的方法具有快速简便、特异性强、敏感性高、可靠性好的特点，适于HIV-1耐药突变位点的快速检测。

主权项

一种能够检测单核苷酸突变的方法，其特征包括：1)通过PCR扩增含有单核苷酸突变位点的基因片段；2)杂交探针探针与扩增片段互补，探针3’端最后一个碱基位于突变位点的前一个碱基，所有探针退火温度控制在42至45摄氏度；3)杂交探针固定在杂交膜的特定位置；4)杂交探针能够作为引物在DNA聚合酶的作用下延伸；5)探针延伸到碱基即为检测的突变位点；6)杂交膜分为4个独立的反应区间，每个反应区间分别加入不同的标记的dNTP或ddNTP；7)延伸反应在杂交膜上进行；8)用四种不同标记物分别标记dATP、dCTP、dGTP、dUTP时，延伸反应也可以在同一个杂交膜上进行；9)杂交的固相载体可以是尼龙膜、硝酸纤维素膜等膜，也可以是玻璃芯片或其他高聚物；10)通过检测标记物判断样品中是否含有特定的单核苷酸突变。