[发明专利]同时快速检测五种染色体数目的方法及试剂盒与应用

摘要

本发明公开了一种同时快速检测五种染色体数目的方法以及应用此方法的试剂盒与该试剂盒的应用。该方法通过同时对以下STR位点进行扩增：D21S1270、D21S1411、D21S1412、D21S1414、D21S1280、D18S535、D18S51、D18S1002、D18S391、D18S386、D13S136、D13S294、D13S305、D13S240、D13S256、DXS337、X22、DXS8377、DXS981、DXYS218、DYS448、SRY和AMEL，将得到的荧光标记的PCR产物变性后，通过毛细管电泳检测，PCR产物的量通过相应位置的荧光峰值面积高低间接反应出来，从而确定21号、18号、13号以及性染色体的数目。实现该方法的试剂盒包括前述位点的引物。该试剂盒能同时对13、18、21和性染色体等五种染色体的数目进行检测，所需样本量少，绒毛、羊水和脐血样品都可以进行诊断。使用该试剂盒，检测成本低，更适用于大规模检测。

主权项

一种同时快速检测五种染色体数目的方法，其特征在于包括以下步骤：(1)使用荧光标记的引物混合物对人基因组DNA中的21号、18号、13号以及性染色体上的STR位点进行PCR扩增，其中，21号染色体的STR位点为D21S1270、D21S1411、D21S1412、D21S1414和D21S1280；18号染色体的STR位点为D18S535、D18S51、D18S1002、D18S391和D18S386；13号染色体的STR位点为D13S136、D13S294、D13S305、D13S240和D13S256；性染色体的STR位点DXS337、X22、DXS8377、DXS981、DXYS218、DYS448、SRY和AMEL；引物混合物中具体的引物序列如下所示：D13S136位点的上游引物为5’‑GGT GCT TCA TGC ATT GCT AA‑3’；下游引物为5’‑TTT AGTGCT TTA TGA TTA CAG TAG AGTGTG‑3’；D13S240位点的上游引物为5’‑CAA CGT TTA TTG ACT TAA AGG G‑3’；下游引物为5’‑CGT GTA GTC CCA GCT ACT C‑3’；D13S256位点的上游引物为5’‑CCT GCG CAA CAA GAG CAA A‑3’；下游引物为5’‑AGG AGA GAG ACA TAA TTG TG‑3’；D13S294位点的上游引物为5’‑CCG AGT GAG CAG CCT CTA AA‑3’；下游引物为5’‑ATC AGA AAT CAG GCC AGT GTG‑3’；D13S305位点的上游引物为5’‑GCGTGTTTGAGGACCTGTCGTTA‑3’；下游引物为5’‑TGCTAATAGAGCAGTTAAGGCAC‑3’D18S51位点的上游引物为5’‑CGAACCCGACTACCAGCAAC‑3’；下游引物为5’‑GACGCATGTTCATGCCACTG‑3’D18S535位点的上游引物为5’‑TCTAGTGACAAAAGCCACAC‑3’；下游引物为5’‑AGTCAGAAATATAGATGAGAATGCA‑3’D18S386位点的上游引物为5’‑TCACCA GAA TCA CTT GGA AC‑3’；下游引物为5’‑TCG ATG AAG TAG CTA AGC AG‑3’D18S1002位点的上游引物为5’‑CAG AGAGTGAATGCTGTACAAACA GC‑3’；下游引物为5’‑CATCATGTGAGTGTGCTTTTCAGGAG‑3’D18S391位点的上游引物为5’‑GGAGTTACCACAGGCAATGTGACT‑3’；下游引物为5’‑TAGTCTTCACTATTCCCATCTGAG‑3’D21S1411位点的上游引物为5’‑ATCATGAATGCATAGATGGATG‑3’；下游引物为5’‑ATT GTG TGT CCT TCC AGG C‑3’D21S1412位点的上游引物为5’‑CGCTGGTTGCAGTGAGTTG‑3’；下游引物为5’‑GGGAAGGCTATGGAGGAGA‑3’D21S1414位点的上游引物为5’‑GCCACCCAGTAAAAAATTACT‑3’；下游引物为5’‑CACTCTGTCTGTCTGTCTATC‑3’D21S1280位点的上游引物为5’‑AGAGGGCATCAAAATTTGGA‑3’；下游引物为5’‑GATGAAATAGGAGCCATAAAGC‑3’D21S1270位点的上游引物为5’‑CTAAGCCACTGTATTATTCAGGGC‑3’；下游引物为5’‑TGTGTCTCCAGGTTGCAGGTGACA‑3’DXS337位点的上游引物为5’‑TGGATCATTCAGCTTTCAGG‑3’；下游引物为5’‑GTGAGAGAGTGAGACCCTGTC‑3’X22位点的上游引物为5’‑TATTGAGAGTTGGAAAGAAA‑3’；下游引物为5’‑CGCATTGTTGCTACTTGAGA‑3’DXS981位点的上游引物为5’‑CTCGATGTGGCCTTCCTTAAATG‑3’；下游引物为5’‑TACTCTCCACTTTTCAGAGTCA‑3’DYS448位点的上游引物为5’‑CAT GGA TCC AAA TAA AGA ACA GAG A‑3’；下游引物为5’‑GCA TAT TTC TTG ATT CCC TGT G‑3’AMEL位点的上游引物为5’‑CCCTGGGCTCTGTAAAGAATAGT‑3’；下游引物为5’‑ATCAGAGCTTAAACTGGGAAGCTG‑3’SRY位点的上游引物为5’‑AGTAAAGGCAACGTCCAGGAT‑3’；下游引物为5’‑TTCCGACGAGGTCGATACTTA‑3’DXS8377位点的上游引物为5’‑CAGATC ATG GCT TAC CAC AG‑3’；下游引物为5’‑GAG CTT TGG AAA GCT AGT GT‑3’DXY218位点的上游引物为5’‑TGTCTATGGGTTTCCTCTGT‑3’；下游引物为5’‑CGTAACTCCGTCTCAAAATA‑3’(2)将步骤(1)得到的荧光标记的PCR产物变性后，通过毛细管电泳检测，PCR产物的量通过相应位置的荧光峰值面积高低间接反应出来，从而确定21号、18号、13号以及性染色体的数目，根据临床生化协会/临床分子遗传协会规定判断标准如下：如果STR位点上等位基因扩增后显示为三个荧光峰，峰值面积比接近于1∶1∶1，可直接判断为三体型，若只显示为两个峰，则计算两个峰的峰面积比值，凡双峰面积比值＞1.8或者＜0.65则可判定为三体，正常双峰面积比值区间为：0.8～1.4，介于两个区间之间的值无法判断，需重新检测。