[发明专利]检测DNA样品中预定位点的突变的试剂盒、方法及应用

摘要

本发明涉及检测DNA样品中预定位点的突变的引物、试剂盒、方法及应用。检测DNA样品中预定位点的突变的方法包括以下步骤使用扩增引物对DNA样品进行PCR扩增反应，使用延伸引物以及ddNTP，以所述扩增产物为模板，进行寡核苷酸延伸反应，以便获得在所述延伸引物的3’端连接一个碱基的延伸产物；以及基于延伸产物的分子量，确定所述预定位点的突变类型。可以有效地确定在预定位点是否发生了突变，以及所发生突变的类型。

主权项

一种用于检测DNA样品中耳聋相关突变位点组合的系统，其特征在于，包括：DNA样品扩增装置，所述DNA样品扩增装置，用于对所述DNA样品进行PCR扩增，以便获得扩增产物，所述扩增产物包含所述突变位点；扩增产物延伸装置，所述扩增产物延伸装置与所述DNA样品扩增装置相连，以便从所述DNA样品扩增装置接收扩增产物，并且对所述扩增产物进行寡核苷酸延伸反应，以便获得在所述延伸引物的3’端连接一个碱基的延伸产物，其中，所述延伸引物的3’端紧邻所述突变位点；分子量检测装置，所述分子量检测装置与所述扩增产物延伸装置相连，以便确定所述延伸产物的分子量；以及突变分析装置，所述突变分析装置基于所述延伸产物的分子量，确定所述突变位点的突变类型，其中，以所述耳聋相关突变位点组合中所有突变位点检测均为阳性时的检测结果为准，所述DNA样品扩增装置内设置有扩增引物对，所述扩增产物延伸装置内设置有延伸引物，所述突变为GJB2基因、SLC26A4基因以及mtDNA的突变，所述耳聋相关突变位点组合为：所述GJB2基因的突变299_300delAT和235delC，所述SLC26A4基因的突变281C>T、919‑2A>G、1226G>A、1229C>T、2027T>A、2168A>G和IVS15+5G>A，以及所述mt DNA的突变1494C>T和1555A>G，所述扩增引物包括第一引物和第二引物，针对所述GJB2基因的299_300delAT突变，所述第一引物为如SEQ ID NO：7所示，所述第二引物为如SEQ ID NO：8所示，所述延伸引物为如SEQ ID NO：36所示；针对所述GJB2基因的235delC突变，所述第一引物为如SEQ ID NO：9所示，所述第二引物为如SEQ ID NO：10所示，所述延伸引物为如SEQ ID NO：37所示；针对所述SLC26A4基因的281C>T突变，所述第一引物为如SEQ ID NO：15所示，所述第二引物为如SEQ ID NO：16所示，所述延伸引物为如SEQ ID NO：40所示；针对所述SLC26A4基因的919‑2A>G突变，所述第一引物为如SEQ ID NO：19所示，所述第二引物为如SEQ ID NO：20所示，所述延伸引物为如SEQ ID NO：42所示；针对所述SLC26A4基因的1226G>A突变，所述第一引物为如SEQ ID NO：21所示，所述第二引物为如SEQ ID NO：22所示，所述延伸引物为如SEQ ID NO：44所示；针对所述SLC26A4基因的1229C>T突变，所述第一引物为如SEQ ID NO：21所示，所述第二引物为如SEQ ID NO：22所示，所述延伸引物为如SEQ ID NO：45所示；针对所述SLC26A4基因的2027T>A突变，所述第一引物为如SEQ ID NO：25所示，所述第二引物为如SEQ ID NO：26所示，所述延伸引物为如SEQ ID NO：48所示；针对所述SLC26A4基因的2168A>G突变，所述第一引物为如SEQ ID NO：27所示，所述第二引物为如SEQ ID NO：28所示，所述延伸引物为如SEQ ID NO：50所示；针对所述SLC26A4基因的IVS15+5G>A突变，所述第一引物为如SEQ ID NO：23所示，所述第二引物为如SEQ ID NO：24所示，所述延伸引物为如SEQ ID NO：46所示；针对所述mt DNA基因的1494C>T突变，所述第一引物为如SEQ ID NO：29所示，所述第二引物为如SEQ ID NO：30所示，所述延伸引物为如SEQ ID NO：51所示；以及针对所述mt DNA基因的1555A>G突变，所述第一引物为如SEQ ID NO：31所示，所述第二引物为如SEQ ID NO：32所示，所述延伸引物为如SEQ ID NO：52所示。