[发明专利]一种适用于烷基酚类药物人工抗原的合成方法

摘要

本发明涉及一种适用于烷基酚类药物人工抗原的合成方法。按照本发明提供的技术方案：其主要以壬基酚类似物为半抗原，用活性酯法将其与载体蛋白牛血清白蛋白（BSA）偶联，用聚丙烯酰胺凝胶电泳测定偶联物的偶联比。本发明的合成方法能够成功合成壬基酚类似物的人工抗原，合成步骤简洁、有效，完全可用于免疫分析当中，为以后人们的研究提供了方便的途径，可以满足国内对其研究的需要。

主权项

一种适用于烷基酚类药物人工抗原的合成方法，其特征在于：以壬基酚类似物为半抗原，用活性酯法将其与载体蛋白牛血清白蛋白(BSA)偶联，用聚丙烯酰胺凝胶电泳测定偶联物的偶联比；具体包括如下步骤：(1)人工抗原的合成：(a)壬基酚类似物、N‑羟基硫代琥珀酰亚胺、碳二亚胺、牛血清白蛋白以摩尔比为80∶120∶136∶1的比例反应，将壬基酚类似物溶于N，N‑二甲基甲酰胺DMF溶液中，然后转移到棕色小瓶中，加入N‑羟基硫代琥珀酰亚胺(Sulf‑NHS)和碳二亚胺(EDC)，室温反应6h，制得A液；将牛血清白蛋白(BSA)溶解到磷酸盐(PBS)缓冲液中，制得B液；然后将A液缓慢滴加到B液中，室温反应3h，离心去掉沉淀，取上清液即得到烷基酚类药物人工抗原混合液；(b)透析袋前处理：取10cm的透析袋，于沸水中煮沸5min，再用60℃的去离子水冲洗3min，保存在4℃去离子水中备用；(c)将步骤(1)制得的烷基酚类药物人工抗原混合液移入透析袋中，每天先用0.01M的pH7.4的磷酸盐缓冲溶液透析2次，磷酸盐缓冲溶液每次用量2L，再用去离子水透析2次，去离子水每次用量2L，共透析3天；最后使用冻干法将透析袋中的液体制成粉末，得到壬基酚类似物‑牛血清白蛋白，即是烷基酚类药物人工抗原；(2)人工抗原的鉴定：采用紫外扫描仪测定得到的壬基酚类似物‑牛血清白蛋白的偶联比，分别在272nm、278nm波长处测吸光值，并计算偶联比。