[发明专利]一种适用于烷基酚类药物人工抗原的合成方法有效
申请号: | 201110304415.4 | 申请日: | 2011-10-11 |
公开(公告)号: | CN102321171A | 公开(公告)日: | 2012-01-18 |
发明(设计)人: | 殷祥刚;胥传来;董激文;匡华;周亮;季晓丹;金勉勉 | 申请(专利权)人: | 中华人民共和国无锡出入境检验检疫局 |
主分类号: | C07K14/765 | 分类号: | C07K14/765;C07K1/113 |
代理公司: | 无锡市大为专利商标事务所 32104 | 代理人: | 殷红梅 |
地址: | 214101 江*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | 本发明涉及一种适用于烷基酚类药物人工抗原的合成方法。按照本发明提供的技术方案:其主要以壬基酚类似物为半抗原,用活性酯法将其与载体蛋白牛血清白蛋白(BSA)偶联,用聚丙烯酰胺凝胶电泳测定偶联物的偶联比。本发明的合成方法能够成功合成壬基酚类似物的人工抗原,合成步骤简洁、有效,完全可用于免疫分析当中,为以后人们的研究提供了方便的途径,可以满足国内对其研究的需要。 | ||
搜索关键词: | 一种 适用于 烷基 类药物 人工 抗原 合成 方法 | ||
【主权项】:
一种适用于烷基酚类药物人工抗原的合成方法,其特征在于:以壬基酚类似物为半抗原,用活性酯法将其与载体蛋白牛血清白蛋白(BSA)偶联,用聚丙烯酰胺凝胶电泳测定偶联物的偶联比;具体包括如下步骤:(1)人工抗原的合成:(a)壬基酚类似物、N‑羟基硫代琥珀酰亚胺、碳二亚胺、牛血清白蛋白以摩尔比为80∶120∶136∶1的比例反应,将壬基酚类似物溶于N,N‑二甲基甲酰胺DMF溶液中,然后转移到棕色小瓶中,加入N‑羟基硫代琥珀酰亚胺(Sulf‑NHS)和碳二亚胺(EDC),室温反应6h,制得A液;将牛血清白蛋白(BSA)溶解到磷酸盐(PBS)缓冲液中,制得B液;然后将A液缓慢滴加到B液中,室温反应3h,离心去掉沉淀,取上清液即得到烷基酚类药物人工抗原混合液;(b)透析袋前处理:取10cm的透析袋,于沸水中煮沸5min,再用60℃的去离子水冲洗3min,保存在4℃去离子水中备用;(c)将步骤(1)制得的烷基酚类药物人工抗原混合液移入透析袋中,每天先用0.01M的pH7.4的磷酸盐缓冲溶液透析2次,磷酸盐缓冲溶液每次用量2L,再用去离子水透析2次,去离子水每次用量2L,共透析3天;最后使用冻干法将透析袋中的液体制成粉末,得到壬基酚类似物‑牛血清白蛋白,即是烷基酚类药物人工抗原;(2)人工抗原的鉴定:采用紫外扫描仪测定得到的壬基酚类似物‑牛血清白蛋白的偶联比,分别在272nm、278nm波长处测吸光值,并计算偶联比。
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