[发明专利]白灵菇与杏鲍菇杂种的分子标记鉴定方法无效
| 申请号： | 201110306047.7 | 申请日： | 2011-10-11 |
| 公开（公告）号： | CN102312012A | 公开（公告）日： | 2012-01-11 |
| 发明（设计）人： | 刘新锐;谢宝贵;吴小平;江玉姬;徐美玲;邓优锦;朱坚 | 申请（专利权）人： | 福建农林大学 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12Q1/04 |
| 代理公司： | 福州元创专利商标代理有限公司 35100 | 代理人： | 蔡学俊 |
| 地址： | 350002 福*** | 国省代码： | 福建;35 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种白灵菇与杏鲍菇杂种的分子标记鉴定方法，包括白灵菇与杏鲍菇亲本菌株选择、原生质体制备、原生质体融合、菌丝的培养与收集、基因组DNA的提取、ITS-PCR扩增、特异酶切片段标记的产生和酶切产物的电泳检测。酶切产物的电泳检测结果，在一个泳道上只有同时出现分子量为675～685bp、435～445bp和235～245bp的DNA标记条带，是白灵菇与杏鲍菇杂交种的标记；本发明的白灵菇与杏鲍菇杂种的分子标记鉴定方法，具有检测时间短、准确性高、容易判断、稳定性好等优点。 | ||
| 搜索关键词： | 白灵菇 杏鲍菇 杂种 分子 标记 鉴定 方法 | ||
【主权项】：
一种白灵菇与杏鲍菇杂种的分子标记鉴定方法，包括白灵菇与杏鲍菇亲本菌株选择、原生质体制备、原生质体融合、菌丝的培养与收集、基因组DNA的提取、ITS PCR扩增、特异酶切片段标记的产生和酶切产物的电泳检测；其特征在于：（1）特异酶切片段标记的产生：在8～12 μL ITS PCR扩增产物, 加入2μL EcoO109I酶的酶切Buffer，0.8～1.2 μL EcoO109I酶, 5～ 9.8μL ddH2O，37℃水浴4～7 h；所述EcoO109I酶的酶切Buffer成份为100mmol/L Tris HCl, pH7.5，100mmol/L MgCl2，10 mmol/L Dithiothreitol；（2）酶切产物的电泳检测：取EcoO109I酶的酶切产物15μL，与3μL上样缓冲液混匀，点样于1.2%的琼脂糖凝胶上，于0.5 X TBE缓冲液中，5V/cm电压下电泳；经电泳检测，在一个泳道上只有同时出现分子量为675～685bp、435～445 bp和235～245bp的DNA标记条带，是白灵菇与杏鲍菇杂交种的标记；所述上样缓冲液：0.1％ 溴酚蓝, 40% 蔗糖。
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