[发明专利]一种DNA烷化损伤的红外光谱快速检测方法

摘要

本发明涉及一种DNA烷化损伤的红外光谱快速检测方法。该方法是利用红外光谱法检测DNA与烷化剂反应后的红外光谱图，并与空白DNA溶液的红外光谱图进行比较，得到峰位和峰强比发生变化的特征基团，从而确定DNA烷化损伤位点及程度。本发明方法具有操作方法简单且样品便于回收、专属性强、灵敏度高、检测速度快以及安全环保等突出特点，可直接对DNA损伤进行快速检测。

主权项

一种DNA烷化损伤的红外光谱快速检测方法，包括以下步骤：(1)称取小牛胸腺DNA，溶于1～20mmol/L Tris HCl溶液中，配制成浓度为4～10mg/mL的DNA溶液，pH值为7～8，向DNA溶液中加入烷化剂乙醇溶液，烷化剂的摩尔浓度为0.25～15mmol/L，在37℃下反应4～10h；(2)采用液膜法进行红外光谱测定设定扫描范围4000～400cm 1，分辨率2～4cm 1，扫描次数100～500，采用氘化三甘氨硫检测器(DTGS)和KBr分束器，首先将Tris HCl溶液滴于非水溶性窗片上，干燥后作为背景扫描，再将DNA空白溶液滴于非水溶性窗片上，采用差减法扣除背景后扫描即可得到DNA空白溶液的红外光谱图，重复测定三次取平均值；(3)将与烷化剂反应后的DNA样品采用与步骤(2)中DNA空白溶液相同的方法进行测定，得到DNA样品溶液的红外光谱图，将得到的所有红外谱图使用大气补偿将空气中CO2和H2O的吸收峰扣除，最后进行基线校正；(4)将步骤(3)中所得的DNA空白溶液和DNA样品溶液的特征谱峰进行比较，根据峰位和峰强比的变化确定DNA烷化损伤的位点和程度。