[发明专利]农杆菌介导的黄瓜转基因方法

摘要

本发明公开了农杆菌介导的黄瓜转基因方法，包括如下步骤：将携带有抗除草剂Bar外源基因的农杆菌工程菌，重悬于用于转化的培养液W8，制备成农杆菌转化菌液；将处于开花期的黄瓜植株嫩梢浸泡于农杆菌转化菌液中，套袋遮光保湿，待经处理后的嫩梢所含的雌花、雄花开花时相互授粉；在苗期进行除草剂草胺膦抗性筛选，得到对除草剂抗性强的植株，定植；取抗性强植株叶片提取DNA，根据Bar基因序列设计引物，进行PCR检测，获得转基因植株。本发明的方法操作简便、转化效率高、转化机理清楚，遗传稳定性好、可对刺瘤类型多种基因型黄瓜材料进行转化。

主权项

农杆菌介导的黄瓜转基因方法，其特征是包括如下步骤：(1)将携带有抗除草剂Bar外源基因的农杆菌工程菌，重悬于用于转化的培养液W8，制备成农杆菌转化菌液，用分光光度计测定并调节农杆菌转化菌液浓度至OD600＝0.8‑1.0，调节pH为5.8‑6.5；(2)将处于开花期的黄瓜植株茎顶端以下10‑20cm嫩梢浸泡于步骤(1)制备的农杆菌转化菌液中20‑30秒，套袋遮光保湿15‑20小时，并做标记，每隔1天处理一次，共重复2‑3次，待经处理后的嫩梢所含的雌花、雄花开花时相互授粉；(3)将经过步骤(1)和(2)后获得的种子在苗期进行除草剂草胺膦抗性筛选，得到对除草剂抗性强的植株，定植；(4)取抗性强植株叶片提取DNA，根据Bar基因序列设计引物，进行PCR检测，获得转基因植株。