[发明专利]植物染色体微切割获取单条染色体的方法

摘要

本发明公开了一种植物染色体微切割获取单条染色体的方法，它是在显微镜下，采用冷激光对需要研究的特定区段的种子植物染色体或染色单体片段进行按人为需要进行切割、分离，从而快速、准确地获得任意一条染色单体或染色单体片段。本发明采用冷激光切割，激光不与分离的样本直接接触，不会因热效应对染色体样本造成破坏，克服了过去的染色体切割技术中存在的污染重，被分离的目标染色体难以完全回收，操作设备复杂等问题。

主权项

一种植物染色体微切割获取单条染色体的方法，其特征在于，它是在显微镜下，采用冷激光对需要研究的特定区段的种子植物染色体或染色单体片段进行按人为需要进行切割、分离，从而快速、准确地获得任意一条染色单体或染色单体片段；具体操作步骤如下第一步，截取0.5cm左右的种子植物根尖端，置于冰水中预处理24h，再移入70％乙醇中低温4℃保存、待用；第二步，采摘上述同种植物的处于减数分裂中期的花粉母细胞(以下称花药)，先用乙醇∶冰醋酸＝3∶1体积比的溶液固定10min，立即转入70％乙醇中低温4℃保存、待用；第三步，对根尖和花药分别移入酶解液中进行酶解，酶解后从酶解液中取出，用无菌双蒸水冲洗后再放置在4℃无菌双蒸水中低渗3次；第四步，对根尖和花药分别进行染色体压片：将根尖和花药分别置于盖玻片上，先滴加品红染色约5min后，轻轻捣碎根尖和花药，再将根尖和花药反转覆盖于载玻片的PEG膜上，轻压一下即可，立即把压好的片子放到‑20℃保存2小h；再从低温冰箱取出，置于无菌操作台上，并用口吹气快速增温，马上用刀片揭开盖片，然后置于70℃烘箱干燥1min，成为根尖和花药的染色体标本片子；立即进行下一步；第五步，染色体的微切割、单体收集和保存：将制备好的根尖和花药染色体标本片子放在显微镜的载物台上，寻找染色体目标，找到后用350nm紫外冷激光切割，切割后的染色单体立即进行收集，并加入20μL的蛋白酶K溶液0.2mL，37℃静置4h，再置于高速离心机中以转速500r/min转4min，分离出含有染色体单体的溶液，将该溶液置于37℃温水中温浴4h，使蛋白酶K充分消化去蛋白，然后置于75℃培养箱20min，使蛋白酶K失活，再放入低温冰箱‑20℃冰箱存放备用。