[发明专利]一种人类线粒体DNA纯化方法

摘要

一种纯化人类线粒体DNA的方法。本方法通过限制性内切酶Bgl II和Dra III、核糖核酸酶A和核酸外切酶III的联合作用，降解基因组DNA或线粒体DNA粗提取液中的核DNA和RNA残余，从而获得高纯度的线粒体DNA。该方法普遍适用于人类线粒体DNA样本的纯化，纯度高、操作简便、用时短，能够满足线粒体研究领域各项技术对线粒体DNA高纯度的要求。

主权项

一种人类线粒体DNA纯化方法，其特征在于包括以下步骤：(1)人类基因组DNA提取或线粒体DNA粗提取。(2)构建酶切反应体系，酶切细胞核DNA，去除RNA残余：向全基因组DNA溶液或线粒体DNA粗提取液(约含有4μg DNA)中加入20μg RNase A、20U Bgl II、40U Dra III、10μL 10×缓冲液I、0.4μL 100×BSA，ddH2O定容至100μL，用移液器温和吹吸混匀，37℃温浴2个小时。(3)消化细胞核DNA：向上述反应液中加入200U Exo III，温和吹吸混匀，37℃温浴2个小时，65℃温浴10min终止反应。(4)酚‑氯仿‑异戊醇抽提线粒体DNA：在上述反应液中加入等体积Tris饱和酚∶氯仿∶异戊醇(25∶24∶1)，4℃、5,000×g转速下离心15min，将水相转移至新离心管并加入2倍于其体积的无水乙醇，‑20℃冰浴20min，4℃、13,000×g转速下离心30min，弃上清，用70％乙醇洗涤，4℃、13,000×g转速下离心5min，弃上清，室温干燥沉淀20min，用100μL EB溶液溶解DNA沉淀，‑20℃保存。